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黄麴毒素之检定方法过程详细解说！

(1)黄麴毒素的化学检定

1.黄麴毒素的抽出物：

根据Knake and Rao的快速定性方法(Knake and Rao, 1972)将100gm玉米样品加300ml溶剂(甲醇：水＝7：3)，以均质机经3,000rpm旋转3分钟，过滤后取滤液150ml加30ml甲苯，在分液漏斗中振盪30秒后，加200ml蒸馏水使乳化，分离上层甲苯抽出物。次添加10gm无水硫酸钠(Anhydrous Sodium Sulfate)及5gm绿色硷性碳酸铜(Green Basic Cupric Carbonate)去除玉米中色素，过滤蒸发至乾涸，溶于1ml甲醇而得黄麴毒素的粗抽出物。

2.黄麴毒素之定性：

利用薄层色层分析(Thin-Layer Chromatography, TLC)法以Wakogel B-5加适量蒸馏水，舖设于玻璃板上，风乾后在110℃下活化1.5小时，将前抽出物以微量吸管(M- icropipette)及取0.05ml点于TLC板上，以TEF溶媒系(Toluence：Ethylacetate：90％Fo- rmic Acid＝9：3：1)展开1小时风乾，在暗室中以364nm的黑射线(Black-Ray B-100 A)照射，与标准黄麴素对照下检出。

3.黄麴毒素B1的定量：

经TLC法检定为阳性样品之黄麴毒素粗抽出物0.2ml点于TLC板，经TEF溶媒系展开后，收集在Rf＝0.31±0.02处的蓝色萤光点溶于定量的甲醇中，黄麴毒素B1的定量计算乃以Beckman Dus-pectrophotometer在362nm波长下吸光度与已知浓度的黄麴毒素B1比较而得。

(2)未知样品中黄麴毒素之检验法

1.将欲测样品磨碎。

2.秤取50gm装入500ml的三角瓶中。

3.加入70％丙酮水溶液250ml，塞上橡皮塞于臂氏振盪器中(或其他振盪装置)振盪30分钟。

    4.用白磁漏斗(Buchner Filter)以Whatman # 1号滤纸过滤。

    5.将滤液倒入400ml烧杯中。

    6.加20％醋酸铅水溶液(Lead Acetate Aqu Solution)及60ml蒸馏水。

    7.水浴锅中蒸发至约剩150ml。

    8.加入少许Gelite后再以1号滤纸过滤。

9.滤液倒入500ml之分液漏斗中，加50ml氯彷(Chloroform)萃取之，连续萃取二次，将下层液注入250ml烧杯中。

    10.蒸发至约剩5ml，加入一量匙100Mesh之硅酸(Silicic Acid)及少量氯彷。

11.用普通漏斗过滤，再以乙醚(Ether)洗涤滤渣三次(每次约50ml)，弃乙醚液。

12.留在滤纸上之滤渣再以5％的甲醇吲漭曋辅G(5％Methanol in Chloroform Sol-ution)洗涤二次(每次约50ml)将洗液装在烧杯中，蒸发至乾涸。

13.残渣以1ml之氯彷溶解后，用1μl的滴管点在硅胶(Silica gel Gtype 60)平板上，同时点上不同浓度之毒素标准液，置于展剂(苯：甲醇：醋酸＝90：5：5)中展开。

14.俟乾燥后置于365nm波长之紫外灯下观察之。

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