标题：解剖显微镜哪有卖？兔子解剖实验的来源和管理！
信息分类:生物-生命科学资讯
作者:yiyi发布
时间:2012-6-18 1:20:13
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正文:
解剖显微镜哪有卖？兔子解剖实验的来源和管理！
一.试验兔只之来源及管理：
自兔场购得已达性成熟（4～5 月龄）不同毛色之母兔（白色毛之纽西兰品种和白毛斑黑之加州品种；黑色毛﹑棕灰色毛和黄褐色毛之雷克斯品种）供试验之用；试验母兔于试验前及试验期间之饲养管理，同颜等所述。
二.母兔之超数排卵以及配种：
处理方法参照颜等（1994）所述。即供胚母兔每隔 12 小时皮下注射 0.17 mg FSH（Sigma, No. F8001），共注射 6 次，并于最后一次注射后 12 小时自然配种，同时静脉注射 100 I.U. hCG 以诱发其排卵。并在首次配种后 1 小时再配种一次。
三.胚冲洗液及培养液之配制：
(一)F-10 基础溶液（Hazieton, No. 56-639-101）〔含碳酸氢钠 1.2 g/ liter，抗生素（dibekacin sulphate, 0.1 mg/ml, Meiji, Lot. No. DKMD 120）〕。
(二)胚冲洗液系修改自 Cheng et al.（1989）所示。其配方为 F-10＋0.4% BSA （bovine serum albumin fraction Ⅴ; Gibco No. 8101018IL）＋1% SPRS（superovulated pregnant rabbit serum）; pH: 7.2～7.4。
(三)胚培养液〔F-10 solution＋1.5% BSA＋10% SPRS〕之配制处理，参照颜等（1994）所述进行。
四.兔 8－细胞期胚之收集和胚叶细胞之分离：
兔胚于体内发育期别之预估，系参考本研究室张和 Ju et al.之报告。母兔经配种后 38 小时被牺牲并被取出其生殖道；再分别冲洗两边之输卵管及子宫。液体回收和胚之收集，以及分离胚叶细胞之方法参照颜等所述。
五.兔 8－细胞期胚及其胚叶细胞被置入空透明带内（＋ZP）之显微操作：
固定和吸取管（holding and suction pipettes）之制备、兔胚或卵空透明带之準备和移置单一（1/8 胚）或二（2/8 胚）枚胚叶细胞入空透明带内（＋ZP）之操作等，同颜等所示。
六.微胶囊包埋已裸露或已装于透明带层内（＋ZP）之胚叶细胞之方法：
海藻酸钙微胶囊材质及溶液之配制和微胶囊包埋裸露单一（1/8 胚）胚叶细胞之方法同颜等（1994）所述。而包埋已装于透明带内（＋ZP）之单一或二枚（1/8 或 2/8 胚）胚叶细胞之方法参照颜等所述。
七.于体外（in vitro ）之液滴培养：
以微滴培养（microdrop culture, 20 μl）之方式，每 10 微滴被安置于一培养盘（3.5×1.5 cm, Nunclon）底面，其上覆盖 1～1.5 ml 之矿物油（mineral oil, light; M-3516），再置于 38 ℃、5% CO2、100% 相对湿度之培养箱内培养。
八.经包埋之胚或胚叶细胞之置入与回收：
(一)受胚母兔之排卵或伪怀孕（pseudo- pregnancy）处理：
考虑及胚之发育期别与受胚母兔子宫腔内环境之生理期别之同步化，以及能弥补胚于体外操作可能发生延迟生长之现象（Adams, 1970; Binkerd and Anderson, 1979）；因此，在胚移置之过程，预先安排供胚和受胚母兔被静脉注射 hCG 之时间，令伪孕之受胚母兔之排卵时间，较供胚母兔者约晚 18 小时。
(二)受胚母兔之麻醉与胚置入之腹腔外科手术：
经伪怀孕处理过之受胚母兔，于腹腔外科手术前一日被禁食。手术前先以麻醉剂 xylazin（5.83 mg/kg BW）和 ketamine（25 ng/kg BW）肌肉注射母兔。待母兔被麻醉后，将之固定于手术板上，剃除其腹部之毛髮，并以酒精棉及浓碘酊消毒拟手术之部位；之后，再以 23 号手术刀片沿其倒数第一﹑二对乳头间之腹中线，切开约 4～5 cm 长之开口并暴露其生殖道。随后，立即以经生理食理盐水润湿之灭菌纱布覆盖，以备胚之置入。
出自http://www.xianweijing.org金相显微镜百科