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正文:
滤膜趋化实验
实验前需适当选择:①细胞培养皿(如Neuro Probe公司生产的盲孔
培养皿或多孔培养皿,也可选用带有滤膜嵌套的24孔培养板);②滤膜(
较厚的纤维素硝酸盐或较薄的聚碳酸盐);③滤膜孔径大小;④滤膜表
面包被(根据实验细胞类型)。通过下列检测使细胞迁移定量:①细胞迁
移入滤膜的距离;②贴于滤膜底面的细胞数;③穿经滤膜和掉人下池的
细胞数。如果一种因子引起细胞迁移增强,需进行其他实验以确定是否
由随机迁移(化学促进作用)或向试剂定向运动(趋化作用),或两种协同
作用引起的。将待测物注入滤膜的上方和下方,按一系列均一(各向同
性的)浓度检测细胞迁移,以此可观察化学促进作用。
计算化学吸引系数和趋化系数。
因大多数化学吸引剂呈剂量依赖性刺激细胞运动,故需仔细分析,
鉴别化学吸引剂刺激引起的运动(化学促进作用)和定向运动(趋化作用)
。解决方法是,通过观察同一部位化学吸引剂(掺入琼脂糖)在不同浓度
情况下对于细胞迁移的作用,检测化学吸引剂刺激引起的运动。根据测
量数据可计算化学促进系数,而化学促进系数可用于评价化学促进和趋
化作用对于细胞以化学吸引梯度形式迁移的相对作用。通过用录像显微
镜观察细胞迁移,可观察到单细胞的朝向和定向迁移。对于已固定细胞
,有研究者以细胞核是否朝向确定细胞是否朝向化学吸引源。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科