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正文:
微型生物个体极小,成为阻碍研究发展的拦路虎。微型生物的研究
进程在很大程度上取决于技术的进步。从技术手段上说,微型生物
研究舞台上演了三部曲:以显微技术为基础的观察分析,以流式细
胞技术为基础的快速定量,以分子生物学技术为基础的多样性分析
与功能基因分析。显微技术(Microscopy)
没有显微镜就没有海洋微型生物研究。
20世纪80年代以前,在微型生物研究技术舞台上显微镜是绝对的
主角,直到今天,显微技术仍然是微型生物研究必不可少的手段。
这里只简介最常用的透射电子显微技术(Transmission E1ectronic
Microscopy,TEM)和表面(落式)
荧光显微技术(Epifluorescence
Microscopy,EFM)。
TEM是了解生物体亚显微结构的可靠方法。大洋环境中聚球藻
的发现和确认就是TEM观察的结果。TEM在原绿球藻的发现和定种上
也起到了至关重要的作用。目前,海洋病毒的观察、分类工作仍主
要由TEM来完成。TEM方法可以观测到包含有病毒粒子的尚未裂解的
细胞,为微食物环(Microbialloop)和病毒环(Virus 100p)的研究
提供了重要参数,具有其他方法无法超越的优势。但是TEM由于其
制样和观测的复杂性,不适用于自然生态调查中超微型浮游生物群
落的定量研究。
与TEM相比,EFM观测需要的水样量小,制样过程简单,观察和
操作快速。采用荧光染色的方法,EFM能区分并定量细菌、蓝细菌
和真核细胞。尽管细胞经过固定染色处理后大小会改变,尤其是甲
醛固定会造成细胞收缩,染色后细胞大小的测定也会由于荧光的光
晕而受到干扰,但是EFM在细胞的大小和形态观测上仍具有一定的
优势。值得注意的是,在没有改进的EFM技术规程中,原绿球藻往
往会被误计为细菌其在贫营养大洋造成的细菌正误差可达30%
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科