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作者:yiyi发布
时间:2011-12-5 0:07:05
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正文:
解剖显微镜干冰法制备永久切片步骤
1. 压片技术
压片技术是使细胞组织解离成主要细胞群或使小细胞群散开成单一个体,有助于对个体细胞和其组织结构的研究。在高等植物中仅发现一种组织其细胞呈一致的零散单位,只是借着压碎细胞便使之分开。这种细胞就是花粉母细胞或一团花粉囊中的花粉。其它组织在作成抹片之前必须先由试剂处理,此试剂将先分解中胶层以使细胞单离。
压片组织的方法比石腊切片技术具有下列优点:
A. 较快速获得结果。
B. 在石腊切片技术中个体被切开成两个或更多的切片,而压片技术则
保持主体细胞在一起。
C. 染色体数可更容易被算出来,且染色体结构更能明白的显示。
目前压片技术为染色体观察常用的方法,因为它不易将细胞壁和细胞质染色而造成观察的干扰。
2. 常用于压片技术的染色方法有两种:
A. Aceto-carmine染色法
B. Feulgen染DNA法
3. 以干冰法制备永久切片的流程:
取蚕豆(Vicia fuba),玉米(Zea mays),豌豆(Pisum sativum)或洋葱(Allium cepa)之根尖制备抹片,进行有丝分裂周期之观察,并作成永久切片。
制片流程
1. 拔取两株幼苗,在烧杯中用水冲洗根部直到去除黏附的蛭石粒子。切下末端1-1.5 cm并且把根尖浸在醋酸和酒精1:3的溶液中抽真空固定20分钟。
2. 由固定液中取出并以蒸馏水淋洗10分钟。
3. 倾倒去水,再加室温之1 N HCl 浸泡2分钟。
4. 倾倒去冷的HCl,并把玻璃瓶子放在60℃的水浴锅中的架子上,加入1 N HCl 60℃作用10分钟,以使根组织软化。
5. 倾倒出热的HCl并且加入蒸馏水处理5分钟。
6. 轻轻倒出水且加入Feulgen试剂到足以盖过根部即可,在暗处作用至少30分钟。
7. 轻轻倒出Feulgen试剂放入干净的容器中,然后用水淋洗3次。
8. 取一根放在干净的载玻片上,加一滴45%醋酸。用镊子夹住根基部且用解剖针或刀切下根尖端1-2 mm。用吸水纸拭去所有45%醋酸,只留一小滴在根部尖端四周。
9. 以一只平底玻璃棒慢慢轻敲根部尖端直到细胞完全捣碎。假如经适当捣碎,当提起玻璃棒时,捣碎的组织将会呈圣代冰淇淋状的小丘。使用圆玻棒其直径约3-4 mm,其两端以高温之火加温至开始熔化时,在一冷的平面玻璃上轻压,使其表面呈现平滑,即可作为捣碎玻璃棒。捣碎根组织时只宜将玻璃棒作上下敲击,不宜作如磨墨之顺时针方向之圆形动作磨碎。
10. 加一小滴45%的醋酸慢慢的轻轻的划圆直到细胞扩散开来。把载玻片放
在几张纸巾之上,再把盖玻片斜放在上,且缓缓以拇指使力压盖玻片。
11. 擦净载玻片底部并且在显微镜下镜检。一直修改压片的技术直到满意的
结果出现即可继续下一步骤以干冰法制作永久玻片。染色时间可以增减调整。
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