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正文:
在昆虫细胞培养中,只有NOV是具有感染性的,多聚常春藤素
基因不是必需的。多聚常春藤素基因的启动子是已知最强的动物细
胞启动子,并在感染周期的晚期表达。将多聚常春藤素的结构基因
用目标蛋白来替代,就可以进行目标蛋白的高水平生产(高至占细
胞蛋白的50%)。分泌性蛋白和糖基化蛋白的生产水平远远低于非
分泌性蛋白。
除了高表达水平之外,昆虫细胞/杆状病毒系统通常比哺乳动
物细胞一逆转录病毒系统具有更高的安全性。来自于卵巢或晶胚昆
虫细胞系是连续的,但不会发生转化。对于动植物,杆状病毒是非
病原性的。因此昆虫细胞一杆状病毒系统就具有潜在的安全优势。
另一个重要的优点是分子生物学方面的优势,以及不到1个月就能
完成正确折叠的蛋白质的高水平表达。
就像giO孚L动物细胞一样,这个系统也具有能够进行几乎所有
复杂翻译后修饰的细胞器。但是,即使存在这样的细胞器,至少有
部分在昆虫细胞一杆状病毒系统中生产的蛋白质并没有加工成和天
然蛋白质完全一样。在某些情况下,这种轻微的改变可能是有益的
(例如:在艾滋病疫苗的开发中增强了抗原反应),但在另一些情况
下可能是无益的。当加工成复杂糖基化形式(包括唾液酸)时,通常
发现只存在简单的糖基化形式。复杂形式产品的生产需要特殊的宿
主细胞系,并对培养条件非常敏感。
昆虫细胞一杆状病毒系统是一种展示异源蛋白质生产整体前景
的良好系统。任何蛋白质生产的生物过程都是很复杂的,包括许多
亚组分的非线性相互作用。因此优化的过程并不仅仅是单个优化步
骤的总和。一个因素是感染病毒颗粒与细胞的比率(例如,感染复
数或MOI),它会改变感染的同步性和所产生蛋白质的表达动力学。
另一个因素是病毒的基因设计(和载体设计的许多特点相似)。病毒
库的质量也很重要。如果没有正确维护病毒库,就有可能形成突变
病毒。一个例子是缺损干扰病毒颗粒(DIP)的形成,当使用高MOI值
时,DIP使培养基中蛋白质的表达减少90%。
出自http://www.bjsgyq.com/
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