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作者:yiyi发布
时间:2011-12-4 20:05:11
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显微镜镜检根尖抹片技术制作步骤
1. 取健康茁壮的根尖1公分以固定液固定(醋酸-95%酒精1:3溶液)15分钟-24小时。
2. 在95%的酒精中清洗,更换酒精数次。
3. 储存于70%的酒精中(若需要的话)。
4. 水化,70%、50%、30%的酒精,水,每一步骤五分钟。
5. 室温下放入浓度1 N的HCl中1-2分钟。
6. 轻轻倒出冷的并加入60℃浓度1 N的HCl,此步骤需快速完成,之后将玻璃瓶放入60℃的烘箱或水浴中6-10分钟。
7. 轻轻倒出热的HCl并换用1 N的冷HCl处理1分钟。
8. 轻轻倒出HCl并以蒸馏水漂洗,更换数次蒸馏水。
9. 加入Schiff试剂使满过组织,根部在10-15分钟内,开始呈现紫红色。在黑暗中进行3-5小时。
10. 轻轻倒出Schiff试剂(此时应是无色的),根尖用水漂洗。
11. 将根尖包括根冠和顶端分生组织切下(颜色染最深的区域)。
12. 取根尖置于载玻片上,盖上盖玻片,随即以拇指压碎根尖(详细步骤请参考下节”抹片制作”)。
13. 如果你要在染色后超过10-15分钟再压碎的话(步骤12),则要用亚硫酸-盐酸混合溶液而非水进行漂白,此步骤可防止全部根段变成紫色。
14. 若进行永久切片之制作,可将已压碎根尖的载玻片立即置于干冰块上。3分钟后盖玻片开始结霜时即以刀或针尖将盖玻片弹开。
15. 将载玻片放入95%的酒精中1分钟。
16. 将载玻片放入纯酒精中2次,每次2分钟。
17. 将载玻片放入二甲苯2次,每次2分钟。
18. 以胶封片。
抹片技术
1. 在载玻片上用微量的水漂洗根部组织。
2. 将根部的尖端染色最深处切下并把未染色部份丢弃。
3. 将根尖撕成小片段。
4. 将盖玻片盖在材料上,在载玻片下垫纸巾然后再放在坚硬的桌面上,用新的橡皮擦轻敲盖玻片。
5. 当细胞被压散之后,盖上软纸巾(卫生纸亦可),再以大拇指或手掌底部压盖玻片。
6. 快速地进行显微镜镜检,若该玻片值得保留;再继续进行永久切片制作。
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