标题：荧光显微镜适合用于观察枯草杆菌以及细胞培养
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2013-2-6 10:21:00
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正文:
荧光显微镜适合用于观察枯草杆菌以及细胞培养
材料与方法
◆ 菌株与质体 (Strains and Plasmids)
本研究使用了三种菌，分别为枯草杆菌 (B.subtilis)、大肠杆菌 (E.coli)以及金
黄色葡萄球菌 (S.aureus)。本实验使用的枯草杆菌 (B.subtilis)菌株为野生型
PY79 的衍生。枯草杆菌是革兰氏阳性菌，在显微镜底下观察呈现杆状；金黄
色葡萄球菌为 MRSA 菌株，亦为革兰氏阳性菌，喜欢群聚生长，细胞型态为
圆球形；大肠杆菌使用的菌株为 K12-MG1655，为革兰氏阴性菌 。
◆ 细胞培养 (General cell cultures)
细胞皆培养于 LB 或 S7 minimal medium，并于指定的温度。实验使用 1 mM
萤光显微镜 (Fluorescence Microscopy)
进行 Time-lapse microscopy 观察前，会于 mounting frame (A-7816, Invitrogen)
上铺上 1％ LB agarose，并区分为有加 1 mM IPTG 与未加 IPTG。细胞控制约
长到对数期中期，之后将细胞离心收下并培养在 agarose pad 上。细胞皆培养
在有温控的培养箱中，实验则使用 Axio Observer Z1 进行观察。
◆ 高解析度扫描式电子显微镜 (HR-SEM Analysis)
将生长至对数期的枯草杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌细胞分别或混合培养
在 LB 或 S7 agar，37℃、3 hr 后将 EM grids 覆盖上细胞，再培养 3 hr。将 EM
grids 轻轻移开并用 0.1M sodium cacodylate buffer (Na(CH3)2AsO2〃3H20; pH 7.2)
洗，之后再用2﹪glutaraldehyde (溶于sodium cacodylate buffer)固定细胞，25℃、
2 hr。接着将细胞培养在 1﹪osmium tetroxide 中，25℃、1 hr 再次固定细胞 (需
避光)。接着用逐渐增加浓度的乙醇使标本脱水。最后，将黏附于 EM grids 上
的细胞用逐渐增加浓度的 freon113 洗。之后将标本 coating 上 gold-palladium (约
8 mm size)后即可使用 FEG HR-SEM 观察
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科