荧光显微镜检测诊断胶原性疾病-斑狼沧抗核抗体(ANA)操作

信息分类:金相文章   作者:yiyi发布   时间:2011-10-28 23:57:47 将本页加入收藏

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荧光显微镜检测诊断胶原性疾病-斑狼沧抗核抗体(ANA)操作

测试方法:

利用间接性免疫萤光法(Indirect immunofluoresence method)测定抗核抗体。用HEP-2细胞做核基质,萤光剂(FITC)做为萤光染料。

 血清样品(一级抗体)滴在含有HEP-2培养细胞之玻片上(抗原)

↓抗原-抗体反应

滴入加羊抗人体免疫球蛋白结合FITC(二级抗体)(Fluroescein Isothiocyanate)

萤光显微镜观察判读(200X)

使用萤光显微镜观察判读(200X)

 【注意】

        玻片製成后应尽快判读。若无法马上判读,可先将玻片存放于4℃

          之黑暗处,24小时内判读。

九、结果判定:

              (-):细胞核内无特异性萤光。

              (±):细胞核内仅见轻微之特异性萤光。

              (+):细胞核内全部或局部可见特异性萤光。

              (++):细胞核内全部或局部可见显着的特异性萤光。

              若血清样品于20X稀释时呈现阳性反应(+,++),则可视为抗核抗体阳性。阳性血

              清可能出现下列几种染色型态:

均质型(homogeneous)

扩散型(diffuse)

斑点型(speckled)

核仁型(nucleolar)

不连续斑点型(discrete speckled)

溷合型

              萤光显微镜之BV系统较UV系统之敏感度高,容易判读结果。

十、判读:

1、利用Poly Titer 仪器判读,操作步骤请参考『Poly Titer系统』。

2、利用CCD可作影像输出,操作步骤请参考『CCD影像撷取系统』。 

十一、注意事项:

1、尽可能使用新鲜的血清。

2、血清样品避免冷藏再解冻,否则会降低抗体效价及产生非特异性反应。

3、勿接触玻片表面之基质细胞,并勿直接以吸水纸吸乾细胞之水分。

4、反应必须在湿润箱中进行。

5、不可使用乳糜血清,否则会导致非特异性反应。


 

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