信息分类:金相文章
作者:yiyi发布
时间:2011-10-28 23:57:47
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荧光显微镜检测诊断胶原性疾病-斑狼沧抗核抗体(ANA)操作
测试方法:
利用间接性免疫萤光法(Indirect immunofluoresence method)测定抗核抗体。用HEP-2细胞做核基质,萤光剂(FITC)做为萤光染料。
血清样品(一级抗体)滴在含有HEP-2培养细胞之玻片上(抗原)
↓抗原-抗体反应
滴入加羊抗人体免疫球蛋白结合FITC(二级抗体)(Fluroescein Isothiocyanate)
↓
萤光显微镜观察判读(200X)
使用萤光显微镜观察判读(200X)
【注意】
玻片製成后应尽快判读。若无法马上判读,可先将玻片存放于4℃
之黑暗处,24小时内判读。
九、结果判定:
(-):细胞核内无特异性萤光。
(±):细胞核内仅见轻微之特异性萤光。
(+):细胞核内全部或局部可见特异性萤光。
(++):细胞核内全部或局部可见显着的特异性萤光。
若血清样品于20X稀释时呈现阳性反应(+,++),则可视为抗核抗体阳性。阳性血
清可能出现下列几种染色型态:
均质型(homogeneous)
扩散型(diffuse)
斑点型(speckled)
核仁型(nucleolar)
不连续斑点型(discrete speckled)
溷合型
萤光显微镜之BV系统较UV系统之敏感度高,容易判读结果。
十、判读:
1、利用Poly Titer 仪器判读,操作步骤请参考『Poly Titer系统』。
2、利用CCD可作影像输出,操作步骤请参考『CCD影像撷取系统』。
十一、注意事项:
1、尽可能使用新鲜的血清。
2、血清样品避免冷藏再解冻,否则会降低抗体效价及产生非特异性反应。
3、勿接触玻片表面之基质细胞,并勿直接以吸水纸吸乾细胞之水分。
4、反应必须在湿润箱中进行。
5、不可使用乳糜血清,否则会导致非特异性反应。
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