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正文:
作为活细胞影像工具的GFP
水母(Aequorea victoria)绿色荧光蛋白(GFP)已经成为研究细
胞和发育生物学很有价值的一种工具。紧凑的桶状结构和3一缩氨
酸发色团是形成功能荧光蛋白所必需的,但是它具有很强的延展性
,可发生氨基酸替代。因此,发色团内部或周围随机和直接突变会
改变激发和发射光谱,并产生较亮的分子。WtGFP的吸收峰为397nm
和475nm。504 nlTl是另外一个绿色的激发峰值。65位丝氨酸的替
代使WtGFP的主要和次要吸收峰变成了一个单一的489nm的峰,但仍
为绿色荧光。这类分子的普遍形态EGFP,即加强的GFP通常还有其
他氨基酸替代和密码子置换,可在哺乳动物细胞高效表达。T203Y
以及$65G突变可使吸收和发射波峰发生红向移动,产生黄色荧光蛋
白(EYFP)。发色团内Y66若被组氨酸或色氨酸取代,可使吸收和发
射峰值发生蓝向移动,分别产生蓝色和蓝绿色荧光蛋白(EBFP和ECP
F)。
水母突变体的光谱未发生红移,没有超出黄色蛋白的范围,但
是其他海洋生物的荧光蛋白延伸到了红色荧光区。例如,从异辐海
葵(Hetractis crispa)提出的HcRed蛋白和从珊瑚(Discosoma)克隆
出的DsRed蛋白。随着缓慢的繁殖这些蛋白质首先疲软,然后在低
浓度下发生自我交结,但是氨基酸的替代可以减少繁殖的次数,并
破坏四聚体产生二聚体甚至单体。
出自http://www.bjsgyq.com/
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