标题：PcR法以其快速、灵敏特点而广泛应用在转化子的筛选
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2017-2-26 21:17:55
将本页加入收藏
下一篇：显微镜观察石细胞细胞壁全面均匀地增厚细胞腔小
上一篇：植物、动物和真菌，都是由真核细胞组成的
点击查看产品参数和报价--丨--
---
---
---
正文:
PcR法以其快速、灵敏特点而广泛应用在转化子的筛选
PCR扩增的优化
特异性、忠实性和有效性是检测PCR扩增的三个标准。三者有时
不可兼得，高特异性的反应条件与高产量的反应条件并不一致，高
保真的扩增会导致低产率。因此应该
根据实验目的优化反应条件。
PCR扩增的特异性主要是由引物的特异性和循环参数来决定的
。循环参数中最主要的是退火温度和退火时间。提高退火温度和降
低退火时间能有效地提高反应的特异性。减少延伸时间、减少ngE
酶量、减少循环次数能提高特异性。
采用高保真的了kgE可以降低反应产物的变异，但其扩增效率
有可能降低。
由于制备模板DNA分子时，会产生一定量的单链DNA分子，这些
单链非靶DNA分子在低温下能与引物退火，随后的扩增反应能产生
非特异性扩增。
PcR法以其快速、灵敏的特点而广泛应用在转化子的筛选上。传
统的筛选转化菌落需要提取质粒后进行PCR检测，考虑到PCR扩增对
模板的纯度要求不高，因此可以直接用菌落扩增，而不用先提取质
粒后再扩增筛选。PCR引物既可以是插入基因的特异引物，也可以
是载体多克隆位点两端的引物(如T7、T3、SP6、M13等)。采用基因
特异引物可直接筛选出目的克隆，而用多克隆位点两端的引物可以
得到插入片段长度的信息。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科