标题：不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定技术
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2017-2-26 0:39:32
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正文:
不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定技术
从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化
子即阳性克隆的过程就是筛选。目前发展起来的成熟筛选方法如下
。
(1)插入失活法：外源DNA片段插入到位于筛选标记基因(Yc生
素基因或卢—半乳糖苷酶基因)的多克隆位点后，会造成标记基因
失活，表现出与转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变，
通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。目前常用的
是口一半乳糖苷酶显色法，即蓝白筛选法。
(2)PCR筛选和限制性内切核酸酶酶切法：提取转化子中的重组
DNA分子作模板，根据目的基因已知的两端序列设计特异引物，通
过PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆，用限制性内切
核酸酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。
(3)核酸分子杂交法：制备目的基因特异的核酸探针，通过核
酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克隆。目的基因特异的核
酸探针可以是已获得的部分目的基因片段或是以目的基因表达蛋白
质的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸或其他物种的同源基因。
(4)免疫学筛选法：获得目的基因表达的蛋白质抗体，就可以
采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可以是从生物本
身纯化出的目的基因表达蛋白质抗体，也可以是从目的基因部分可
读框(open reading fμme，ORF)片段克隆在表达载体中获得表达
蛋白质的抗体。
上述方法获得的阳性克隆最后要进行测序分析，以最终确认目
的基因。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科