标题：应用共聚焦显微镜可用来定位细胞内的荧光标记
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2016-12-26 0:58:59
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正文:
共聚焦显微镜可清晰地显示相对较厚的(厚达几百微米)标本内
部结构图像，尤其适于检测荧光标本。使用传统的宽视场荧光显微
镜时，由于标本全层的荧光团都被光照到，而且它不仅收集焦平面
上的荧光信号，还收集焦平面上下方的荧光信号，所以用它来观察
较厚荧光标本时，图像模糊且反差小。而共聚焦显微镜则选择性收
集来自标本内部相当于单一焦平面的光切面(约lgm)的光线。由于
共聚焦显微镜基本没有来自离焦区的光线，所以它所观察的焦平面
内结构要比传统显微镜清晰得多。一系列不同厚度的光切面可使标
本的三维图像得以重建。
在检测组织片或完整的小生物(如果蝇和斑马鱼的胚胎)中的荧
光染色细胞时，可选用共聚焦显微镜。共聚焦显微镜也可用来定位
分离细胞内的荧光标记分子。由于其灵敏度较高，甚至可以用来监
控活体标本内的荧光，使得示踪荧光探针如绿色荧光蛋白的利用成
为可能。此外，有些型号的共聚焦显微镜加以调整后，可用于光漂
白实验及光敏化“笼锁”分子(紫外光照射前为失活状态)。光切基
础
共聚焦显微镜通过聚焦光束扫描标本及荧光信号的收集来实现
光切，所收集的荧光信号为通过空间滤波器(-g-为针孔式)的所有
光点，而空间滤波器是用来阻挡来自标本离焦区域的信号的。
荧光共聚焦显微镜进行光切的结构基础。光源(常为激光器)均
匀地照亮物镜后焦平面，并将光线聚焦在标本内的衍射极点上。尽
管焦平面上下方也能被照到，不过焦点照射强度最大。由入射光激
发的荧光分子向各个方向发出荧光。物镜收集的荧光聚焦在像平面
上，它与标本内的焦平面是共轭的(共焦的)。像平面内的针孔孔径
允许标本内照明点发出的荧光通过并到达检测仪，但却阻止来自离
焦区域的光线通过。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科