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玻璃化技术
将悬浮于液体薄膜中未染色的生物颗粒物质玻璃化,辅以冰冻
电子
显微镜术,是一种比负染色更优越的结构分析方法。冰冻电子
显微术本身有一定的技术难度,但近年来这些问题已经在很大程度
上被克服了。须知那些未染色的玻璃化或者冰冻含水的标本必须在
严格的低温、低电子剂量下研究,同时必须应用数字图像处理,这
样才能将电子显微照片固有的对比度低的影像的结构信息复原出来
。吸附于炭或平展于孔洞中的风干的负染标本,亦可以在葡萄糖
或海藻糖溶液存在时,于低温下进行研究。葡萄糖、海藻糖可以为
生物材料提供有效的保护,提高标本移动度或降低被支持碳材料吸
收,防止标本扁平。这种低温负染色技术某种程度上比未染色标本
玻璃化操作简便,可以得到约为1.5nm的分辨率,但与近年来刚刚
发展起来的结合了玻璃化技术以及负染色技术二者优点的冰冻负染
色技术相比,还是逊色了一些。
负染色和玻璃化未染色标本的制备都使用未经固定的材料。而
铂一碳或钨一铱金属投影技术要求预先固定生物材料,用蒸馏水透
析的方法完全除去固定液以及缓冲盐,再吸附于云母、碳底物或重
悬于挥发性盐,如醋酸铵、醋酸氢铵,常常还含有甘油的缓冲液后
需进行洗涤。冰冻断裂技术、金属投影的分辨率一般低于负染色技
术以及未染色玻璃化材料的冰冻显微术的分辨率,但是在冰冻干燥
、冰冻断裂的样本中,金属在真空中蒸发的颗粒很匀称,得到的结
果相当好。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科