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正文:
免疫标记
在现代细胞生物学研究中,在细胞结构和分离得到的大分子中
对抗原进行免疫标记显得相当重要。免疫标记技术可以在树脂包埋
生物材料前/后应用(包埋前/后标记,,也可以与负染色法(详见
实验方案2.3)、玻璃化法以及
金属投影技术很好地结合。胶体金
是连接抗体(IgG/Fab/Fab’)或者其他配体如蛋白A/蛋白G、卵
白素/抗生物素蛋白链菌素(生物素化的蛋白)以及凝集素的最常用
的高电子密度标记物。可以购买到的胶体金颗粒直径为1~20nm不
等,可以在同一组织上利用不同大小的胶体金标记的抗体(二抗)作
多重标记。包埋后最重要的是抗原性的保持。包埋后标记的一个潜
在困难就是待测抗原决定簇可能经受不了在脱水、包埋之前常规应
用高浓度固定剂[如3%戊二醛(体积分数)]进行组织固定。所以,2
%甲醛一o.5%戊二醛(体积分数)常用于固定,它们可以保存细胞
蛋白质的抗原性,但是对于组织结构的固定效果就略显不足。近来
可以购买到1.4nm金颗粒(NanogoldTM)标签以及o.8nm 11金标签
。这些探针可与抗体和链亲和素连接,在将来可能对高分辨率的细
胞及大分子标记领域产生越来越深远的影响。
专门技术
真空镀膜术、超薄切片术、冰冻超薄切片术、高压冻存术、冷
冻置换术、冰冻断裂术以及活塞冰冻术的使用都不包括在本书的范
围之内,在别处都能找到完全的操作步骤,但是建议最好直接从电
镜实验室的技术人员或科研人员处学习。通常在局部的统筹安排和
资金的支持下,电镜实验室的工作人员会作为服务性角色向实验室
的所有仪器使用人员提供相关
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科