标题：孵育行酶细胞化学反实验制备-生物图像显微镜
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2016-11-14 19:48:19
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正文:
手工切片(徒手切片)
若实验室条件不具备，没有以上各种仪器，用双面刀片徒手切
组织也可进行酶细胞化学反应。手切时应尽可能将组织切薄，一般
能切到0．1nm左右的组织薄片。但是由于孵育液渗透问题，一般只
能在30—40微米厚的组织内进行酶反应，而用铈法时，由于铈离子
渗透力弱，反应一般只能在20—30pm厚的组织内反应。所以手切组
织薄片的酶反应组织，其中央往往反应很微弱，甚至没有反应，因
此，超薄切片时只能使用组织表面20—40微米的部分。由于手切组
织太厚，酶反应不均一，因此一般只限于酶定位的定性研究，不太
适合于定量研究。孵育
孵育是酶反应的重要步骤。组织切片在孵育液中发生酶反应，
尔后产生反应产物。每种酶的孵育液配方，一般文献介绍有几个，
要注意选择合适的配方。这往往需要通过实验和经验来确定。大多
数酶反应都是与pH有关的，孵育液必须有良好的缓冲作用，所用的
缓冲系统的能力必须足以对抗水解步骤中通常会释放出来的酸，孵
育液的pH要精确调节。
孵育前为了使组织内部建立细胞化学反应所需的pH、离子浓度
等合适的环境。一般需将组织切片置于没有底物的孵育液中浸透30
min左右，使组织内部建立酶反应所需的pH和足够的捕捉剂浓度。
然后再入孵育液中进行酶反应。孵育液一般均需新鲜配制，立即使
用，否则会产生底物的非酶性分解而形成人工产物。孵育液中底物
浓度理论上太高会抑制酶活性，但实践中一般底物浓度是稍过量的
。孵育液中捕捉剂浓度一般也比较高，但太高也会抑制酶活性。另
外，配制孵育液时，一些阴阳离子也是很重要的，它们参与酶促反
应，并与形成的最终反应产物有联系，因此，孵育液中必须有合适
的离子种类和浓度参与反应。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科