标题：在同一样品中使用多种荧光染料实验显微镜
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2016-7-17 4:17:58
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正文:
为了在同一样品中使用多种荧光染料;必须仔细确定每一
抗原只能被一种标记试剂识别。最安全的方法就是使用被不同
荧光染料标记的第一抗体。染色可以同时进行，但是必须包括
进行单独染色的对照样品以用于监测交叉反应。开始最常遇见
的是第一抗体没有被标记;而只能通过间接法监侧。在这种悄
况下，抗体必须来源于不同的种、纲或亚纲，然后用被标记的
第二抗体专一性的识别每一种第一抗体。通常要检测试剂的专
一性，因为针对于某一种、纲或亚纲的抗体可能与大量的其他
种、纲或亚纲的抗体发生相互反应，除非它们被专一地吸附
(多家厂商提供的、来源于其他物种并以固定化的血清蛋白预
吸附的第二抗体)。因此要尽可能使用来源于同一物种的第二
杭体。例如，当使用一种兔多克隆抗体和一种小鼠的单克隆抗
体时，就应当使用产于山羊的血清为阻断剂。另外一项重要的
对照实验是监测检测试剂的种间交又反应，.即进行每一种第一
抗体与专一性识别区域的第一抗体的第二抗体之间的每一免疫
染色实验。
为了减少交又反应，多重染色也可以在固定步骤间连续进
行。在涉及两种抗体情况时，例如常常面临来自同一类型的两
种小鼠单克隆抗体，则最好有一种直接标记。为了避免可能出
现的第二标记抗体与该标记的第一抗体的结合，在连续染色
时，最后用标记第一抗体染色的方法也是非常可取的。
总之，为了进行多重标记免疫染色实验，必须注意下而二
个垂要标准:
①所选择的荧光染料必须具有较好的光讲分辨特性。
②为了避免相互识别，第二抗体必须来源于同一种宿主动
物。它们也不能识别所用的其他第一抗体和在检测中存在的其
他任何免疫球蛋白.而且他们也不能直接与样品反应。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科