标题：共聚焦显微镜在亚细胞荧光染色实验中应用
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作者:yiyi发布
时间:2016-7-17 4:18:10
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正文:
链霉抗生物素蛋白一生物素一过氧化物酶法
免疫染色
为了防止切片干燥，整个染色过程应在湿盒中进行。这里
描述的方案目的在于高灵敏度和省略复染，这样可以检测甚至
微弱的阳性反应，并能提供足资保存的黑白照片，并可避免通
常用苏木精核复染造成的干扰。
①复水后的冰冻切片或石蜡切片(后者需进行暴露抗原步
骤以应必须)已可进行染色。为了阻断一抗的非特异性结合，
用含有5％～20％正常血清(和二抗中所用同种动物的血清)
的溶液预处理切片(如在本例中用生物素化的抗体)室温孵育
20分钟。
②吸干切片上多余的封闭液。
③用对所研究周期蛋白质特异的第一抗体孵育切片。一抗
可以是一种杂交瘤组织培养上清液，或多克隆或单克隆抗体
(纯化的或腹水)。用加有载体蛋白(3％BSA或10％血清，最
好用与第一步中用于阻断非特异结合的同种属的血清)的PBS
适当地稀释一抗。抗体合适的稀释度与最适的孵育时间必须根
据预染色实验确定，但一般对多克隆抗血清和腹水稀释度在
基菲吮，碘化丙锭〕。可透过多种荧光的滤光装置(用于观测
多种荧光染料在进行基Vi定位时非常有用，因为用不161的滤光
器观测标记荧光和逆染色可能产生记录误差，以及很难在染色
体的正确位置上标绘出荧光信号)。例如染色体以DA PI染色
时，一个可透过三种荧光的滤光器允许同时观测德州红和
FITC信号。虽然共聚焦显微镜在亚细胞荧光抗体染色实验中
有用，但在FISH中并不适用，因为它的影像分辨率一般不如
标准的荧光，而且激光照明光源的强度足以迅速淬灭样品。但
是在用FISH研究厚组织切片时可以充分利用共聚焦显微镜
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科