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正文:
最通用的FP和EGFP非常明亮,因此即使在一般的表达水平,它们也具有较高的
信噪比。另外,儿种新引入的来源于珊瑚虫的FP显示出远超出EGFP的
荧光水平。所
有这些因素可以使成像的灵活性大增,甚至在显微镜光学条件和数码相机特性不太理
想的状况下也能有很高的实验成功率。尽管如此,习惯于使用免疫荧光采用内源信号
扩增成像的科研入员可能会发现FP的荧光比较弱。这种情况在实验需要使用一种弱光
突变体(如BFP, CFP或远红外荧光蛋白)时更为明显。在这种情况下,信噪比可能
相当的低,因此需要优化FP的检测。检测的效率主要取决于三种因素:物镜、滤光片
和检测器。限于篇幅,无法在本章中讨论如何选择某些特定应用的最优组合的细节和
平衡优化。但是有儿个通用的原则应该被一直遵循。
虽然物镜的选择通常被最少考虑,但是在成像实验优化配置时物镜可能是最需要
重点考虑的因素。物镜决定样品成像的空间分辨率和控制从样品收集的荧光址。通常
情况下,最好选择具有最大数位孔径(NA)的镜头,因为这样可以最大可能地收集信
号.其他在实际操作中需要考虑的因素还有工作距离、视野和在镜头设计中的光学校
正
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科