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正文:
用图像处理程序处理数据。用一个激发波长下采集的图像以像素一像索除以另一
波长下采集相应的图像,计算出比值图像。通过除法运算除以显像的强度范围
(例如对于8一比特图像为0-256的范围),重新限定数据使之表现为分数形式。
细胞边缘以外的背景区一般只有很低的强度,但经相除后仍可能得到有效的比
值。因此通常根据排除低强度背景区所需的最低限度,将一个二元式“光罩”
应用于各比仇图像。配给和掩蔽的详细情况在参考文献102中举例说明。常用
伪彩色调色板显示比值图像,各种颜色经较正后表示不同的pH范围。
分析两种校准方法的数据:如步骤6所述.①已知pH的稀释染料图像和②用
甲胺控制已知pH的细胞图像.用已知pH对计算的比值作图,制备标准曲线:
可用①中整个区域的平均比值,也可用②中大盘对象所测得的平均比值。通常
各方法得到的比值比较一致,根据比值构成的标准曲线可确定细胞比值图像中
每一含荧光位置的pH.
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出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科