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正文:
重组DNA技术在商业化水平的应用需要对合适宿主一载体系统进行
审慎的选择。大肠杆菌极大地促进了复杂的基因操作,但是出于工
艺过程或产物方面的考虑,建议使用替代的宿主。酿酒酵母很容易
培养,并且是安全的,在监管许可方面也非常简单。但是对于一些
蛋白质来说,酿酒酵母的生产率比较低,过度糖基化也是一个问题
。毕氏酵母能生产高浓度的蛋白质,但甲醇的使用给反应器控制和
安全带来了挑战。芽孢杆菌和低等真菌具有很好的分泌系统,如果
能够很好地控制它们,将是非常具吸引力的。若必须经过翻译后修
饰,就需要利用动物细胞培养。哺乳动物细胞提供了类似于真实天
然产品的最高保真度。昆虫细胞系统具有潜在的高表达能力以及比
哺乳动物细胞更高的安全性,但是降低了翻译后加工过程的保真度
。对于需要复杂翻译后修饰过程的蛋白质来说,转基因动物是一种
很好的替代方法。转基因植物和植物细胞培养适合于大量蛋白质的
生产。植物特别适合生产用于口服或局部释放的蛋白质。
宿主一载体系统仅在其能维持足够长的时问来生产商业上非常
重要的产品时才是有用的。遗传不稳定性是指丢失了制造目标蛋白
的遗传信息。当细胞分裂时产生无质粒细胞,即发生了分配不稳定
性。细胞由于质粒结构的改变而丧失了大量合成目标蛋白的能力,
即结构不稳定性。宿主细胞导致的不稳定性发生在宿主染色体突变
降低了质粒编码蛋白质的有效产量时,而此时细胞仍然保留有质粒
。与生长速率相关的不稳定性是无质粒细胞和含质粒细胞之间生长
速率细微差别的结果。在决定发酵能够维持多长时间方面,遗传不
稳定性是一个决定性的因素。可以使用简单的模型来估算遗传不稳
定性。
为达到优化目标过程的目的,必须对载体进行设计。需要考虑
的因素包括:载体拷贝数、启动子强度、启动子的调节、融合蛋白
质的使用、信号序列与分泌、提供选择性压力的基因以及提高质粒
分配精度的元件。
出自http://www.bjsgyq.com/
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