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正文:
在多光子激发荧光显微技术中,荧光发色团是被两个或更多的比发射光波长
更一长的光子所激发的。
因为激发只发生在
显微镜的焦点上,所以不对准焦点的就吸收的很少,
因此有更多的激发光到达聚焦平面。在原理上,多光子激发荧光显微技术法有
三个主要优点:具有很强的穿透厚样品的能力;采用红外光激发而实现对活细胞光
损伤最小化,以及减少聚焦平面外的光漂白
多光子显微技术在改善深嵌于植物组织中的微生物细胞的成像方面具有很大的应用
潜力。因为其他类型显微镜照明用的紫外光会引起植物细胞受到一定程度的光损伤,
所以多光子显微技术对于植物表面上具有紫外吸收能力的荧光发色团标记的细菌细胞的
显微成像非常有用。这为微生态研究入员提供更多的可用荧光发色团,来研究在植物
环境中细菌的行为。但是有证据表明,实际_仁聚焦体积内的光漂白效应比单光子激发
更严重,特别是对于薄的样品。甚至对于绿色荧光蛋白(GFP)这种被认为是相
对稳定的荧光分子也是如此。但是,更进一步限制该技术在植物微生物学中应用的事
实也许是,多光子显微技术本身的分辨率始终比单光子显微镜技术(如CISM )低。
尽管如此,多光子显微技术大大改善了植物组织的三维成像效果,但实际上
该技术仅适用于尺寸较大的微生物的成像,而不适用于细菌。据我们所知,目前多光
子显微技术主要应用于微生物学生物膜的研究上。随着价格低廉的多光子显微镜的推出,
时间会告诉我们多光子显微技术是否有利于对植物
表面上或内部的细菌细胞进行成像。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科