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正文:
一、设备
1準备室:供器具洗涤、乾燥、培养基配置及杀菌作业
2.无菌室:供无菌操作之处,应喷洒酒精以消毒室内空气。为防止污染空气,经由进出口处进入室内,应有空气喷射装置或双门设备。
3.培养室:培养室需考虑温度、光线、湿度及空气含菌程度。
温度—以20~25℃范围内为宜,有时尚须另行设置15℃、20℃、25℃或30℃定温箱。
湿度—相对湿度保持在70~80%程度为宜(自然湿度状态)。
光线—以普通日光灯或植物灯照射烧瓶,每日照明16~24小时。植物在灯光长日照射下,可易于吸收营养、促进生长。
二、无菌操作
1.无菌操作台或无菌箱(胶布罩盖下的简易无菌操作)
2.杀菌液
a.70﹪酒精溶液:器具与操作台的消毒
b.次氯酸钠溶液(1%~5%):植物体消毒
3.消毒器材
a.高压蒸汽灭菌器(autoclave sterilizer):以120℃高温加热15~20分钟,一次完成杀菌工作。
b.酒精灯与燃烧器:供刀具与镊子等杀菌之用
c.细孔过滤器:在高温下易分解的吉贝素(gibberellin),可用此方法消毒。
三、器具
1.铝箔纸
2.皿盘
3.手术刀、镊子与剪刀
4.组织培养瓶
四、培养基
1.培养基成分
a.水:可利用一般自来水,若系试验或研究则使用蒸馏水
b.无机盐类:氮、磷酸、钾、镁、硫、铁及少量硼、锰、锌、碘、钼、铜及钴等。
c.有机化合物
碳水化合物—一般以20~30g/l浓度的蔗糖作为碳素来源。
植物荷尔蒙—生长素(NAA、IAA、2,4-D、IBA)、细胞分裂素(BA、玉米素、激动素)。
维生素类—VitB1、VitB6、菸碱酸可用于癒合组织及细胞培养;
生物素、叶酸、VitB12、泛酸钙可供增殖用。
胺基酸—甘氨酸(glycine)可促进生产的效果。
d.天然物
椰子乳—促进癒合组织及细胞培养时之器官分化效果,通常于培养基中添加10~20%。
香蕉—以黄熟后的150~200g/l香蕉汁,加入培养基中有促进发育的效果。
马铃薯—削去皮与芽煮后用纱布过滤,再将其溶液加入培养基中,有香蕉的效果。
e.活性碳(active carbon)—经加温乾燥的活性碳加入浓度1~10g/l培养基内,可自培养基中吸取有害物质。
2.培养基底材
一般系用洋菜(Agar)
出自http://www.bjsgyq.com/
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