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正文:
试验处理:
(一)处理一:微胶囊包埋或未包埋已装于透明带内(+ZP)之单一和二枚胚叶细胞(1/8 和 2/8 胚)于体内和于体外培养至 72 小时之发育。
1.体外发育试验:单一和二枚胚叶细胞(1/8 和 2/8 胚)(+ZP)于体外之发育率:
(1)试验设计:完全逢机设计。
(2)组 别:1/8 和 2/8 胚(单一和二枚胚叶细胞,+ZP),共计二组。
(3)试验步骤:取自 3 头经超数排卵并配种处理之 8-细胞期兔胚(配种后 38 小时),在其被去除外围之粘液蛋白层和透明带层并分离胚叶细胞后,被利用显微注射法将单一或二枚胚叶细胞分别置入已制备之空透明带内(+ZP),使成 1/8 和 2/8 胚;再予以液滴培养 24~72 小时。于培养期间,逐日观测并记录各不同胚叶细胞数组之胚叶细胞分裂数;用以评估 8-细胞期兔胚之 1/8 和 2/8 胚(单一和二枚胚叶细胞,+ZP)于体外培养之发育率。
2.体内发育试验:经海藻酸钙胶囊包埋和未包埋之单一枚胚叶细胞(1/8 胚,+ZP)于体内迄移置后 72 小时发育率
(1)试验设计:完全逢机设计。
(2)组 别:胶囊包埋之 1/8 胚组(ME+ZP)和未包埋之对照组(+ZP),共计二组。
(3)试验步骤:取自 8 头母兔之 8-细胞期胚,如前试验之方式,将其个别之胚叶细胞装入已制备之空透明带内(+ZP)以制成 1/8 胚。随后逢机将源自同一胚之 1/8 胚,分为两组。其中之一组经海藻酸钙胶囊包埋(ME+ZP 组)后,即与未包埋之对照组(+ZP),分别经由输卵管之繖部移置入受胚母兔两侧之输卵管腔中;并于胚叶细胞被置入后之 12、24、48 和 72 小时,分别将置入之胚叶细胞自受胚母兔生殖道中,回收并镜检;用以探讨已装入透明带内之 1/8 胚(单一胚叶细胞)经海藻酸钙胶囊包埋后被移置入受胚母兔之输卵管内迄 72 小时之发育实貌。于本实验,同时移置仅以胶囊包埋之裸露胚叶细胞,以评估胶囊结构物于体内降解退化之概况。
(二)处理二:兔 8-细胞期胚之单一和二枚胚叶细胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)于体内迄怀孕第 20 天或终了之育成率
1.单一和二枚胚叶细胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)之着床率比较:
(1)试验设计:完全逢机设计。
(2)组 别:不同之胚叶细胞数〔单一和二枚胚叶细胞组 (1/8 和 2/8 胚,+ZP)〕和移置前于体外经历不同培养时间(0 和 24 小时组)各两组,共计四组。
(3)试验步骤: 供处理之胚叶细胞系源自 6 头经超数排卵和配种处理母兔之 8-细胞期胚。如处理一.于体内发育试验之方式,将源自同一胚之单一和二枚胚叶细胞,分别注入空透明带内制成 1/8 和 2/8 胚。随后,1/8 和 2/8 胚组被逢机分成二群,分别于胚叶细胞被分离并注入透明带内当时,立即(0 小时组)或再经历体外培养 24 小时后(24 小时组)被移置。每群之 1/8 和 2/8 胚,逢机被置入同一受胚母兔左右两侧之输卵管内,其步骤同前述。而受胚母兔被注射 hCG 之时间较供胚者迟 18 小时。本试验系用以探讨装入透明带内(+ZP)之不同胚叶细胞数〔单一(1/8 胚)和二(2/8 胚)枚〕在其被移置前于体外经历之培养时间(0 小时和 24 小时),对置入之胚叶细胞之着床率(置入后第 20 天)以及怀孕终了之育成率之影响。
2.单一和二枚胚叶细胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)之着床率比较:
(1)试验设计:完全逢机设计。
(2)组 别:胚移置前于体外经历之培养时间(0 和 24 小时组)和不同之置入途径(经由输卵管繖部或子宫腔壁)各两组,共计四组。
(3)试验步骤:取自 6 头经超数排卵处理供胚母兔之 8-细胞期兔胚,其胚叶细胞被如前述之步骤(处理一),每二枚胚叶细胞被注入空透明带内(2/8 胚 +ZP)。随后,2/8 胚被逢机分成二群,分别于胚叶细胞被分离当时(0 小时组)和于体外培养 24 小时后(24 小时组)被移置。每群之 2/8 胚,再被逢机经由输卵管繖部或子宫角腔壁置入生殖道内;用以探讨胚叶细胞在被移置前于体外培养之时间(0 和 24 小时)和置入生殖道所经由之途径(输卵管和子宫角腔壁),对置入之 2/8 胚(+ZP)迄置入后第 20 天之着床率以及怀孕终了之育成率之影响。
出自http://www.bjsgyq.com/
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