标题：肾上腺髓质嗜铬细胞实验原理和步骤！可拍照显微镜价格
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2012-6-17 1:25:30
将本页加入收藏
下一篇：溶素体的发现！生物显微镜价格，生物显微镜报价！
上一篇：实验用显微镜出售！北京实验显微镜哪有卖！北京显微镜门市！
点击查看产品参数和报价--丨--
---
---
---
正文:
初代细胞之分离－肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla)
实验原理：
1. 肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla)，为内分泌腺体，在胚胎发育过程中源自于外胚层之神经脊，因此保有许多与交感神经节后神经细胞之特性，为研究此类实验不错的材料之一。
2. 嗜铬细胞为肾上腺中负责分泌儿茶酚氨(catecholamine)之作用，由于铬盐会与catecholamine结合形成黄色化合物，故称为嗜铬细胞。
3. 肾上腺髓质亦于其他内分泌系统的腺体，在于其不受下视丘及脑下垂体的控制，而是直接接受中枢神经传来的讯息分泌catecholamine，藉由血液循环作用至目标器官，catecholamine可增进肝糖分解、加速心跳、升高血糖、提供生物体对抗或逃离危险之应变能力。
4. 嗜铬细胞在初代培养中(primary culture)数天后，其型态会有所转变，会具有类似神经细胞之生长特性之长椎突出，细胞内液含有神经细胞特有之蛋白质。
5. 此外嗜铬细胞具有对膜电位敏感之Ca2+与Na+之通道(voltage-sensitive channels)。因此嗜铬细胞常被当作模型系统，用来研究神经衝动的传导过程及”刺激-分泌”偶合反应(stimulus-secretion coupling)之机转。
实验步骤：
剪去牛肾上腺外的脂肪
↓
以perfusion buffer从腺体开口来回灌洗
↓
配置collagenase solution，以酵素原液于37℃水浴槽来回灌洗肾上腺5min，在静置作用10min
↓
将髓质取下以剪刀剪碎
↓
将髓质置入四倍稀释的collagenase solution于37℃水浴槽作用30min
↓
以孔径400μm的尼龙网过滤混合液，过滤后离心(1200rpm, 5min, 4℃)
↓
倒除上清液，沉淀物以perfusion buffer重新悬浮，再离心（重複三次）
↓
去除上清液，摇晃细胞液，并缓慢低入lock’s buffer或loading buffer至50ml
↓
再以尼龙网，将凝结在一起的细胞过滤掉，之后离心(1000rpm, 5min, 4℃)
↓
将细胞以PBS悬浮至适量体积，进行细胞显微照相
实验结果：
将分离到的肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla)以PBS悬浮之后，于显微镜下进行照相保存，其结果记录成图一及图二。其中图一为没有用trypan blue染色的结果，图二为有用trypan blue的染色结果。在图一中细胞较小的部份为肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla)；在图二中白色亮点的小细胞亦为肾上腺髓质嗜铬细胞。
结果讨论：
在实验的过程中，以perfusion buffer从腺体开口来回灌洗的步骤主要是要将红血球洗乾淨，以免在分离肾上腺髓质嗜铬细胞时会有多馀的红血球。我们在实验的过程中，因为时间上的限制，所以红血球并未完全被清乾淨，在细胞离心的时候可以看到pellet旁边有一小块红色的红血球pellet。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科