标题：细胞继代培养购买什么显微镜比较好？
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2012-6-13 14:41:35
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正文:
细胞继代培养购买什么显微镜比较好？
回复：倒置生物显微镜
细胞继代培养实验
1. 附着型胞 (adherent cell)
（1）吸掉旧培养液。
（2）用D-PBS洗涤细胞一至二次。
（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液。﹙若不移去trypsin-EDTA，则在trypsin-EDTA作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用，离心后再吸掉上清液。﹚
（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
2. 悬浮型细胞 (suspension cell)
（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000 rpm 5分钟。
（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
3.融合瘤﹙hybridoma﹚
（1）有些hybridoma cell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大，可倾斜放置，或分殖至新培养瓶中。
※注意事项
● 细胞生长至高密度时，即须分殖至新的培养瓶中，一般稀释比例为1：3至1：10，依细胞种类而异。
● 无菌磷酸生理缓衝液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free, D-PBS, GibcoBRL 21600-010)
● trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA.4Na, GibcoBRL 25300-062)：以10ml分装于15ml无菌离心管中，保存于-20℃，使用前放在37℃水槽回温。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科