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正文:
液体培养基来提取染色体DNA、RNA或酶
抱子悬液有多种用途:可用于接种液体培养基来提取质壶或染
色体DNA、RNA或酶,制备原生质体;筛选突变体,用来在杂交中
进行重组分析和质粒转化。以20%甘油悬浮液贮藏在一20℃的孢
子,即使经多次取样仍可存活几年(但是也有例外,如不产孢子的
秃型突变株和某些淡青链霉菌的链霉菌素敏感菌株)。
制备孢子悬液简单的步骤如下:从已经长好孢子的固体培养
物上刮取孢子,悬于水中,用棉花过滤以除去菌丝片段和固体培
养基碎片后,离心得到孢子沉淀。离心也可除去培养基中的可溶
性成份(这些成份中包括生长因子,它们会影响营养缺陷型标记的
选用,或包括一些可降低孢子寿命和抑制孢子萌发的“腐化。物
质)。
材料
溶液、化学试剂等:无菌水,20%甘油(高压灭菌)。
小仪器:接种环,吸管,用于过滤的装有脱脂棉的试管(见图
1)'离心管;旋盖小瓶(7.5ml和20m1)。
仪器设备:混合振荡器,台式离心机。
试验步骤
*1.在斜面或平板上加入9ml无菌水o
2.用接种环刮取培养物表面的孢子,首先轻轻地,然后逐渐
用力刮,以使孢子悬浮。
3.将此粗制的孢子悬液倒入离心管中,并在振荡器上尽可能
地激烈振荡1分钟左右o
4.用装有脱脂棉的试管过滤悬液。 ·
5.将滤液倒入离心管中,3000转/分离心5—10分钟以使孢
子沉淀。
·6.停止离心后,马上倒掉上清液。
·7.将离心管在振荡器上振荡几秒钟,使孢子沉淀物分散于
残
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科