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复合子结合,以及跨膜结构域的特征。例如,如果通过预测某蛋白
结合了一个类似亚铁血红素这样的氧化还原活性复合子,我们就可以推
测它在电子转移中会发挥作用。要谨记的是数据库预测只是推测,还要
通过实验确认;然而这些程序对预测的准确验证仍有很大的帮助。
一旦证实通过突变鉴定的特定基因参与了目的代谢过程,许多探索
试验都成为可行。依靠相似的表现型鉴定的各种突变后,可以在分子水
平上构建工作模型。可以从确定基因如何催化目标和环境相关因素如何
调节开始研究。假设这个代谢过程的基因已被确定,可由此设计分子工
具(PCR探针,抗体)来监视给定环境中该进程是否发生。一旦某基因的
操纵元件(例如启动子)被确定后,就可以设计工程菌来表达该基因。例
如,一个目的基因的启动子克隆到质粒中并启动一个能被
荧光或比色检
测的蛋白表达(gfp的表达,它编码绿色荧光蛋白[GFP];或lacZ编码B半
乳糖苷酶)。在实验室中通过调控各种环境因素结合荧光定量或B半乳糖
苷酶活性来准确考察目标基因的表达情况。
而基因融合则能同时检测转录和翻译。后者的报告基因与编码目的
蛋白的基因融合,因此当它表达时,其带有的报道标签也得以表达。根
据标签的种类,能够直接在活细胞中检测到翻译的融合产物
最后,基因产物的生化性质研究可以在野生菌中或在其他能够超量
表达该基因的克隆菌株中进行。许多重要的机理问题可以在该研究阶段
得以回答。例如,一旦蛋白纯化的方法得到发展,就可以通过研究晶体
结构来确定细胞中其他相关蛋白的性质。
出自http://www.bjsgyq.com/
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