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正文:
DNA超微检测技术
对快速和高通量诊断系统的需求促进了小型化杂交和检测技术
的研究和开发,在此基础上,已产生了一个新的工业标准,即DNA
超微检测技术。具有高度特异性的寡核苷酸探针被固定在一个载体
表面,它们适于进行显
微观察,一种新的检测技术就这样产生了。
此后,该技术又有了新的发展,即在一个载体表面同时包被有许多
种特异性的核苷酸探针。为了能够筛查到和找出任何可能的基因工
程改造成分,新开发出来的超微检测平台只需一个检测步骤就能对
不同的基因工程
生物分布情况进行把握。如果一个经过标记的样品
DNA通过特异性杂交反应被俘获在该载体表面,那么通过该DNA,便
可获得大量有关转基因的相关信息,既有数量方面的,同时也可以
对样品进行定性。在这些分析方法中,大多数是以
荧光标记的分子
作标签,然而,近来又相继开发出一些新的检测技术,其中包括电
子的、酶化学的、扫描显微镜的、毛细管电泳的和光学感应的方法
,而这些新技术有些已经得到成功地应用
。例如,有几种检测方法利用了微流体实验芯片技术,它们可以同
时对PCR产物进行定性和定量分析。另外还有一种更加独特的方法
,它利用了压电亲和感应器技术,通过将寡核苷酸固化在电极的表
面,当与靶标DNA分子发生杂交反应时,该电极会产生压电信号,
由此便可以直接对基因工程生物的DNA进行检测,根据压电信号的
变化,可确认样品中有无转基因成分存在。然而,在这种情况下,
仍然需要进行一个DNA靶标的预扩增反应,因为这样可以提高检测
的灵敏度。在将来,纳米技术也可能为基因工程生物DNA的定性和
定量提供一个技术性平台,这种技术也许会更迅速和更经济(希望)
。
DNA的质谱分析
利用质谱技术(MS)可以对PCR产物进行快速分析,这类方法中
包括了电喷射质谱和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI
—TOF)。这两种检测技术最初都是用来研究其他有机大分子的,如
蛋白质,而目前,它们对DNA片段也可以进行分析和研究,主要依
据的是DNA的相对分子质量和它们所带电荷的不同,一般情况下,
只允许对200bp左右的短基因片段进行分析。若能将这种快速而又
灵敏的技术应用于短DNA序列分析中,或者更进一步应用在植物和
病毒基因组的遗传变异研究方面,那么样品的分析时问将会大大缩
短。利用种特异性基因组DNA片段文库作为参照物,对转基因和传
统基因组进行比较,将能够迅速找出转基因样品和非转基因样品之
间的不同点。近来,为了验证的目的,利用质谱技术对一些DNA短
重复序列进行了分析和研究,结果表明该技术确实是可行的。尽管
DNA的质谱分析研究目前还受到核酸分子体积的限制,但这些分析
方法将会变得越来越重要,原因在于对高通量检测方法的需求正在
增大。
出自http://www.bjsgyq.com/
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