标题：显微镜下在单细胞个体水平上测定细菌分析显微镜
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2017-8-16 20:04:19
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正文:
显微镜下在单细胞个体水平上测定细菌分析显微镜
GFP作为细菌基因表达的报道基因
荧光标记与报道基因技术的结合使用被证明是植物上细菌行为
的一种有力的研究工具。荧光报道基因和目的细菌基因的融合使得
我们能够在显微镜下在单细胞个体水平上测定细菌基因的转录活性
，而不是在群体水平上。因此，在特定环境下我们就能够测定基因
的转录活性的分布，由此可进一步了解基因潜在表型所发挥的作用
。
除非实验研究是在无菌条件下开展，否则还需要一个额外的标
记基因来将研究细菌对象与植物本身的内生细菌区分开来。额外标
记的使用将确保由于所包含的目的基因转录活性低甚至没有从而导
致报道基因信号很低的细菌能够被检测出来。在首次该类研究中，
Brandl等人将功基因与E. herbicola的生长素( IAA)合成基因融合
在一起，用荧光原位杂交(FISH)技术研究IAA合成在这种豆叶细菌E
. herbicola种类中的分布。将含有功融合基因的转化FL herbicol
a菌株接种在植物上，培养以使细菌生长定植。然后，从叶片表面
将细菌细胞漂洗下来，在显微镜玻片上用对E. herbicola特异性的
四甲基罗丹明标记的16S rRNA探针进行荧光原位杂交。对获得的荧
光显微图像进行数字分析来测定经FISH染成红色的细菌细胞所发出
的绿色荧光强度。单细胞GFP荧光强度的分布频率表明，在叶面上
仅有很小比例的E. herbicola细胞高水平地表达了IAA基因，表明
叶片表面存在某些微生境有助于IAA的大量产生。随后采用同样方
法的研究表明，E. herbicola可利用的蔗糖和果糖，Pseudomonas
syringae(13]可利用的铁离子在植物表面的分布是不均匀的。在上
面的所有研究中，荧光原位杂交能够对同一种细菌在菌株水平上进
行特异性的标记。此外，利用罗丹明来标记16S rRNA探针所发出的
荧光发射光谱信号与GFP荧光信号有明显的区别，从而可避免对显
微镜滤光下荧光信号的错误判断。光学串扰是在多标记荧光实验的
一个主要问题。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科