心肌细胞缺氧缺血清及再灌流模式试验方法！
信息分类:金相文章
作者:yiyi发布
时间:2011-12-26 11:44:23
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心肌细胞缺氧缺血清及再灌流模式试验方法！
(1)实验目的：
利用H9C2心肌细胞缺血缺氧的情况，以模拟心肌梗塞情况。
(2)实验材料：
H9C2细胞，H9C2 medium，细胞培养箱，No Glucose DMEM，Biospherix Model Proox，Calibration Chamber，Calibration Chamber with tubing，N2。
(3)实验方法：
1.从冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回温。
2.进行Biospherix Model Proox主机校正。
3.拔下Calibration Chamber后方的O2 sensor，接上Calibration Chamber with tubing，另一端接上主机前方的Bleed gas outlet小孔。
4.将GAS钮搬动在OFF位置。
5.开N2气，慢慢鬆开Bleed Valve，观察O2读值，应为0，若不为0，则需进行ZERO校正。
6.ZERO功能校正：通是按↑↓键3秒，会进入Program mode，再按↓键会看到LEVEL目录，按住*键以↑键选择目录3，放开*键后按↑键至ZERO功能，按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加，↓键为减少)，调整完毕，同时按↑↓键3秒会到Work mode，观察O2读值约5分钟，反覆调整直到读值为0%。
7.关紧Bleed Valve，拔开Sensor，让Sensor在室温下测大气O2浓度约5分钟，若不为21%，则需校正。
8. SPAN功能校正：通是按↑↓键3秒，会进入Program mode，再按↓键会看到LEVEL目录，按住*键以↑键选择目录3，放开*键后按↑键至ZERO功能，按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加，↓键为减少)，调整完毕，同时按↑↓键3秒会到Work mode，观察O2读值约5分钟，反覆调整直到读值为21%。
9.关闭无菌操作台UV灯，并开启无菌操作台风扇及日光灯。喷酒精于无菌操作台平面，并擦拭乾淨，以达到消毒效果。
10.将要使用到的物品，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。
11.将细胞，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。
12.将玻璃吸管接再pump的塑胶吸管上。
13.去除细胞培养液，再加入PBS清洗细胞，并来回轻轻摇摆几次。
14.控制组加入5ml H9C2 medium，实验组则加入5ml No Glucose DMEM。
15.控制组放入培养箱培养。
16.实验组则放入0%氧气的Calibration Chamber培养24小时。
17.取实验组移置到培养箱培养1，3，6小时。
18.于时间点收集细胞。
(1)实验目的：
利用H9C2心肌细胞缺血缺氧的情况，以模拟心肌梗塞情况。
(2)实验材料：
H9C2细胞，H9C2 medium，细胞培养箱，No Glucose DMEM，Biospherix Model Proox，Calibration Chamber，Calibration Chamber with tubing，N2。
(3)实验方法：
1.从冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回温。
2.进行Biospherix Model Proox主机校正。
3.拔下Calibration Chamber后方的O2 sensor，接上Calibration Chamber with tubing，另一端接上主机前方的Bleed gas outlet小孔。
4.将GAS钮搬动在OFF位置。
5.开N2气，慢慢鬆开Bleed Valve，观察O2读值，应为0，若不为0，则需进行ZERO校正。
6.ZERO功能校正：通是按↑↓键3秒，会进入Program mode，再按↓键会看到LEVEL目录，按住*键以↑键选择目录3，放开*键后按↑键至ZERO功能，按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加，↓键为减少)，调整完毕，同时按↑↓键3秒会到Work mode，观察O2读值约5分钟，反覆调整直到读值为0%。
7.关紧Bleed Valve，拔开Sensor，让Sensor在室温下测大气O2浓度约5分钟，若不为21%，则需校正。
8. SPAN功能校正：通是按↑↓键3秒，会进入Program mode，再按↓键会看到LEVEL目录，按住*键以↑键选择目录3，放开*键后按↑键至ZERO功能，按住*键再以↑↓键调整数值(↑键为增加，↓键为减少)，调整完毕，同时按↑↓键3秒会到Work mode，观察O2读值约5分钟，反覆调整直到读值为21%。
9.关闭无菌操作台UV灯，并开启无菌操作台风扇及日光灯。喷酒精于无菌操作台平面，并擦拭乾淨，以达到消毒效果。
10.将要使用到的物品，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。
11.将细胞，喷酒精消毒，并擦拭乾淨，再带入无菌操作台内。
12.将玻璃吸管接再pump的塑胶吸管上。
13.去除细胞培养液，再加入PBS清洗细胞，并来回轻轻摇摆几次。
14.控制组加入5ml H9C2 medium，实验组则加入5ml No Glucose DMEM。
15.控制组放入培养箱培养。
16.实验组则放入0%氧气的Calibration Chamber培养24小时。
17.取实验组移置到培养箱培养1，3，6小时。
18.于时间点收集细胞。
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