电子显微镜下观察具有少量似膨胀且不完整的次病毒颗粒构型
信息分类:金相文章
作者:yiyi发布
时间:2011-12-6 17:59:49
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传染性鸡华氏囊病病毒 (Infectious bursal disease virus, IBDV)结构蛋白 VP2的胺基酸序列仅含有两个Cysteine基团，分别是位于SD domain的Cys-99与 PA’ domain的 Cys-197。本研究以大肠杆菌表现系统与昆虫细胞杆状病毒表现系统生产重组点突变 Cysteine的 VP2蛋白，探讨 Cysteine在VP2蛋白中的重要性。大肠杆菌所表现的蛋白有VP2-C99A、VP2-C197A、VP2-C197T、VP2-C197S、 VP2-C99.197A；昆虫细胞表现系统则表现 VP2-C99A及VP2-C197A蛋白。利用纯化次病毒颗粒系统-固定化金属离子亲和性层析法 (Immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC)进行蛋白质纯化，结果显示大肠杆菌或昆虫细胞杆状病毒所表现的 VP2-C99A点突变蛋白仍会形成次病毒颗粒并可被 IMAC纯化，电子显微镜下观察出粒径约 20- 25 nm。除了VP2-C99A蛋白，其它由大肠杆菌所生产之点突变蛋白皆丧失与 IMAC亲和性吸附力。昆虫细胞所表现之 VP2-C197A突变蛋白，表现量下降，大部份蛋白于 Flow-through及 pH 7.8 binding buffer缓冲溶液被冲堤下来，此突变蛋白对 Ni-NTA的亲和键结能力变弱，电子显微镜下观察具有少量似膨胀且不完整的次病毒颗粒构型。实验结果证实 VP2蛋白胺基酸序列中的 Cys-197为 VP2蛋白组装成次病毒颗粒的重要胺基酸。
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