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基因载体转殖 (Vector Transfection)

目的：将含特定基因的DNA载体送入哺乳动物细胞中，以表达特定蛋白质。

原理：目前将DNA送入真核细胞有Calcium phosphate处理法、Polybrene处理法、DEAE-
dextran处理法、Electroporation处理法、Protoplast fusion法、Liposome处理法以及直
接将DNA注入细胞核内的显微注射法 (Direct microinjection into nuclei)。Liposome是
人工合成之胞膜，被研发当作活体或离体试验的运送载体。应用原理是将DNA或
RNA包于Liposome中，由Liposome与细胞膜融合将DNA或RNA送入细胞内。

仪器用具：二氧化碳水套式培养箱、倒立式萤光显微镜、无菌操作台、四孔细胞培养皿、无
菌定量吸管。

药品试剂：小鼠胚胎细胞株NIH/3T3、无血清无抗生素细胞培养液、完全培养液、含绿萤
光蛋白GFP (Green Fluorescence Protein)基因的DNA载体、转殖试剂lipofectamine
2000。

步骤：
1. 将NIH/3T3以0.5 ml无抗生素细胞培养液, 0.5–2 × 105个细胞/孔的密度植入四孔培养
皿中，培养24小时。
2. 对每一孔细胞转殖实验，以50 µl无血清无抗生素培养液稀释溷合0.8 µg欲转殖的
DNA质体。
3. 对每一孔细胞转殖实验，以50 µl无血清无抗生素细胞培养液稀释溷合2 µl转殖试剂
lipofectamine 2000后，静置于室温下5分钟。。
4. 将前述两项DNA与转殖试剂lipofectamine 2000稀释液溷合静置于室温下20分钟。
5. 对每一孔细胞转殖实验，将100 µl的前项DNA与lipofectamine 2000溷合液加入四孔
培养皿中的一孔。前后摇动培养皿后，再放回二氧化碳水套式培养箱中培养。
6. 培养4–6小时，可吸出转殖溷合液，换上新的完整细胞培养液。继续培
养14–44小时，即可以倒立式萤光显微镜观察绿萤光蛋白表达之情形。

四孔细胞培养皿

倒立式萤光显微镜

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