信息分类:生物-生命科学资讯
作者:yiyi发布
时间:2012-1-19 1:43:33
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plaque assay详细的步骤?显微镜百科!
1.病毒以汉克缓冲液 (Hank's solution) 做十倍连续稀释,由10-1稀释至10-7。
2.把单层细胞的上清液吸掉后,加上病毒稀释液0.05 ml,每一稀释液接种二个洞(well)
并放置在37 ℃温箱一小时,其间每十五分钟摇动一次,使病毒可充分与细胞接触。
3.二倍的Eagles液与二倍高级琼脂等量溷合,即成一倍的工作液,(Eagles 培养液放在
37 ℃水箱半小时) ,此时温度约为41℃,每一洞内加0.5ml。
4.放37 ℃温箱培养,并含二氧化碳2.5 %。
5.48~96小时,显微镜观察有CPE时,以10% 福马林固定液一滴加于一个洞中,过夜。
6.固定后之微量盘置于水龙头下,以水冲掉琼脂,倒放,使水份流乾。
7.以1 % 结晶紫染液二滴染色一分钟,再以自来水冲洗染液,直至无染料洗出为止。
8.自然乾燥后,便显出无色的不规则空洞。
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