标题：转染细胞理想技术通常取决于细胞类型-聚焦显微镜
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2017-3-11 22:03:00
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正文:
转染细胞理想技术通常取决于细胞类型-聚焦显微镜
GFP结构转染细胞
转染细胞最理想的技术通常取决于细胞类型。通过磷酸钙共沉
淀或者脂质体的技术，DNA很容易转染进某些类型的细胞。然而，
对于其他类型的细胞需要电穿孔甚至病毒转染。本书所描述的是基
于可以买到的脂质体试剂FuGENE6转染方法。
准备要成像的细胞：将细胞按一定密度种在6或者12孔板的盖
玻片上或者分室盖玻片(如Labtek，Mat-tek)上。
如果使用的脂质体试剂要求无血清培养基，则去除含有血清的
生长培养基，换成无
血清的培养基以增加细胞转染的效率(FuGENE6不需要此步骤)。3
．在一个无菌试管中加入100弘1无血清的生长培养基。4．加3“l
的FuGENE6试剂，混合。5．加入1pl的o．5p．g／pl的荧光素标记
蛋白表达质粒，混合。6．室温孵育20min。7．每4cm2面积的细胞
加入100弘1上述混合液。8．孵育直到固定，免疫染色或活细胞成
像。据报道，FuGENE6和许多其他的脂质体试
剂对大部分细胞的生长和蛋白质的表达没有有害影响，然而，3
～8h后仍然需要换
生长培养基。例如，假设此方法中每4cm2的细胞需要lml生长培
养基；因此，用无
血清培养基制备的100弘1脂质体一DNA复合物会轻微稀释血清的
浓度。应该注意稀释
的程度。
哺乳动物细胞时延性共聚焦成像
以下的许多步骤适用于任何配置的显微镜，不过本例是关于时
延性共聚焦成像的，这是一个普通的GFP时延性成像试验，使用的
是激光扫描共聚焦显微镜。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科