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正文:
分离细胞的主要亚细胞组分包括:①致密细胞器,如线粒体、细胞
核和溶酶体;②膜系统,包括细胞膜、高尔基复合体和内质网;③细胞
骨架结构;④蛋白质及小的细胞溶质颗粒。组织的四种主要类型是上皮
组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织。所有组织都含有组成其功能单
位的特殊细胞类型。毗邻细胞之间,以及细胞与细胞外基质或者基底膜
之间的结构和化学黏附机制维持着组织的完整性。细胞由多种特异连接
复合体连接在一起,这些复合体涉及到不同的细胞骨架微丝和不同家族
的细胞黏附分子,包括二价阳离子依赖的钙黏素和黏附素(M92+和Ca2+)
。组织的裂解过程要求破坏细胞间的黏附并对细胞的伤害最小。因为分
离过程本身有损细胞的完整性和功能,所以为保障分离的细胞具有完整
细胞活力和功能,必须优化针对特异细胞组分的分离条件。
其次,研究亚细胞组分的实验结果的可靠性依赖于获得这些组分的
分离细胞的质量。用于分离单一细胞的方法一定要能维持群体的活力和
代谢活性;用于关联结果的一条定量基线和实验组内结果比较是非常必
要的。细胞数、细胞活力和蛋白质含量的检测可以提供这个基线。
实体组织,包括血液、胸和腹渗出液在内的
生物液体和细胞系都是
分离细胞的潜在来源。从新鲜组织来的细胞可能是异质性的,因此需要
鉴别细胞的方法。建议确认从细胞系分离出的细胞类型。
不同组织的结构异质性妨碍了使用同一种方法分离细胞。尽管组织
特异性的分离方法具有一些共同特征,例如使用机械方法将组织打散为
小块,及使用酶消化支撑基质以释放单细胞。可以通过改变酶的种类、
酶的浓度、消化时间和温度,来优化从不同组织获得单细胞的方法。
但从细胞培养需要维持细胞的代谢和增殖功能的角度来看,它们都
是相关的。移植培养用于细胞数量很少的细胞群,需要扩增细胞的数量
。
这里仅提供了用于分离人卵巢癌组织细胞的实验方案,而没有提供
适用于各种特异组织的不同实验方案。这些肿瘤的特点迥异,需要许多
实验技术去完成,这就为机械法和酶消化法分离细胞提供了一个出发点
。实验方案适用于不同类型的组织,也可以作为建立最优分离条件的基
础。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科