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正文:
理论上,对BCM的正确计数应该是以总红外阳性计数减去蓝细
菌计数获得。但是原绿球藻的存在使得无法确认红外阳性计数中的
总蓝细菌数。因为原绿球藻是大洋中丰度最大的蓝细菌,他也能够
被CCD捕获到红外
荧光,但其单细胞叶绿素含量较低,其红色荧光
信号会被海水中共存的聚球藻的强红色荧光信号所掩盖,因此在曝
光的最初时间内无法被CCD捕获到。根据荧光半衰期的原理,当细
胞在激发光下曝光一段时间后,聚球藻与原绿球藻的红色荧光强度
差别会缩小,这样原绿球藻才能够逐渐与聚球藻同时被CCD捕获到
。因此,在蓝细菌的时间序列成像过程中,准确的总蓝细菌(原绿
球藻和聚球藻)数并不是最初的图像计数,而是经过一段时间曝光
后的计数。所以,每个视野的BCM的精确计算公式是:BCM细胞数一
红外荧光时间序列成像时处于稳定期的红外阳性细胞数一红色荧光
时间序列成像时处于稳定期的蓝细菌细胞数。TIREM方法对传统显
微镜方法理念是一个冲击:在传统的落式荧光显微法或IREM法中,
为避免荧光淬灭人们往往选择快速观察检测计数;而TIREM方法的
实践告诉人们,时间序列的观察是获得可信数据的关键。在对BCM
和蓝细菌的实验室纯培养的检测和野外海水样品的检测,都验证了
TIREM法的有效性。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科