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正文:
萤光抗体的原理
显微镜标本之製作
(一) 玻片及盖玻片 (Slide and Coverslips)
玻片及盖玻片品质必须很好而没有萤光,玻片厚度 ≦1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必须以中性清洁剂洗淨,再浸于含有 3%HCl 之乙醇 12~24 小时,然后再储存于纯酒精。要用时,以清洁纱布擦淨或火焰烘乾。用完后可浸于水中,移去封埋物,再经清洁剂及重酪酸-硫酸溷合物*处理。
*重酪酸一硫酸溷合物之配法:
粗製重酪酸钾 300 gm
20% 硫酸水溶液 3000 ml
使用珐琅质或陶质容器,先放入 20% 硫酸水溶液,然后缓缓加入粗製重酪酸钾,以玻璃棒搅拌,此时会发热,俟冷却后使用。
目前已有处理好的玻片出售,使用上甚为方便。
(二) 组织切片 (Tissue Sections)
组织切片愈薄愈好 (4μ),如果切片太厚,则可能自体及非特异萤光增加,目前都用冷冻切片机 (Cryostat) 来切,冷冻切片机包括冰冻柜 (Refrigerated Cabinet),温度在 0℃~-30℃ 之间,切片机 (Microtome) 放在裡面,将组织在 -20℃ 冰冻 10 分钟,就可以切,切下之薄片,以玻片捺下后在室温急速乾燥。製备好之切片必须儘可能马上固定及染色。如果切片必须储放短时间 ( 约 1 週 ),则固定后密封储放于 -70℃,要染色时,切片必需回温到室温方启开。
(三) 细胞培养法 (Cell Culture Preparation)
细胞培养法一般用盖玻片在组织培养盘 ( 例如 24 孔 )或培养在玻璃片 (Chamber Slide) 上,再和普通接种病毒一样,接种可疑病材乳剂,培养数天,取出,乾燥、固定、水洗,再用标示抗体染色以检查特异萤光。
(四) 涂抹法或捺压法 (Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄,一般用盖玻片代用,将所要检查之病材,如血液、组织液或其他病材,在玻片上涂抹或捺压,涂抹或捺压片在室温用吹风机或电风扇 ( 以冷风吹乾 ),以甲醇或丙酮固定,放于密封显微镜标本箱于 -20℃ 备染或马上染色。
(五) 固定 (Fixation)
除了使组织固定于玻片外,另一方面亦可助抗原-抗体複合物之形成,例如把脂质溶解,使抗体抗原较易反应。一般用 100% Methanol 在室温作用 2 分钟,或丙酮于 -20℃ 下 10 分钟来固定微
生物抗原及病毒。
出自http://www.bjsgyq.com/
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