标题：图象分析仪、显微分光光度计、荧光显微分光光度计
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2016-11-13 17:54:15
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正文:
近年来，不仅在光镜，也在电镜的超微结构水平上进柠原位
杂交研究，并用图象分析仪、显微分光光度计、荧光显微分光光度
计等进行原位杂交的定量测定，使该技术的应用范围不断扩大，并
和其它先进技术相互渗透、相互结合，从而形成原位杂交断层摄影
术、原位杂交—免疫组化并检技术、双重或多重原位杂交技术、原
位杂交特异核酸流式计数法、染色体高分辨暨原位杂交特异基因位
点定位法等原位杂交一般操作步骤
原位杂交的操作过程较为繁杂，方法也较多，不仅用于冰冻切
片、石蜡切片，而且还用乏塑胞涂片、染色体滴片及电镜超薄切片
等。不同的切片其操作步骤有所不同，这里介绍原位杂交的一般操
作步骤。
固定
冰冻切片敏感性高于石蜡切片，在前者可检出单拷贝核酸，在
石蜡切片则需5—6个拷贝方可检出。为防止DNA或RNA的丢失，组织
要经三次固定：①预固定，即对实验动物进行灌注固定，用多聚甲
醛固定液优于戊二醛固定液。②取材固定，指取材后进行直接浸泡
固定或冰冻切片后进行固定。用酒精一冰醋酸(3：1)固定，可提高
杂交率，又可保存良好的组织形态。细胞学涂片可用甲醇—冰醋酸
(3：1)固定液固定。醛类固定剂可用于电镜水平的研究，但杂交率
低，电镜的原位杂交一般采用多聚甲醛固定。凡含戊二醛、汞，铅
等的固定液一般不宜采用，因为它们干扰DNA的解链。③后固定，
指组织经蛋白酶、核酸酶处理后，用多聚甲醛作后固定，以稳定核
酸，提高杂交效率。组织保存时间和保存方法直接影响RNA的检出
，冰冻切片仅在一个月内有效。石蜡切片制成后应立即使用，若在
4℃保存，6个月内有效。时间太长，杂交效率低。
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科