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酵母菌细胞之制备
取培养盘上少许细胞,将其溶于3.0 mL SD medium-His培养液中,置于轨道震盪器(orbital shaker)上培养隔夜。
取100μL菌液,加上900μL培养液,以
分光光度计波长600 nm (OD600)或显微镜测定,估算其细胞个数
以酵母菌的生物效应作为环境荷尔蒙中雌性激素的侦测指标。
试验将以经过基因转殖的酵母菌PL3作
为雌性效应的生物测试指标,以人造雌性荷尔蒙作为试验的参考物质,并以
分光光度计与显微镜计数细做比较,
细胞浓度过高均需经过稀释而后上机分析;显微镜计数费时,分光光度计于细胞浓度过低侦测不到,
但较为迅速,推估数目与显微镜推估值相当。以分光光度计分析选择波长600 nm可降低培养液的干扰。
初始细胞浓度过高50000或100000 cell/well,若以96孔盘培养,因不易达混合效果,会造成细胞集结的现象,
造成高估的结果。人造雌性激素雌二醇与乙基雌二醇对此酵母菌增生试验,
以乙基雌二醇效果较雌二醇佳,生长速度较快。以乙基雌二醇做测试,
50 ppn即可促进酵母菌PL3增生,反应相当灵敏
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科