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正文:
不同物镜倍率
不同收光物镜倍率的使用,观察区大小会跟着改变,对于
荧光讯号的收集效果也会不同。
显微镜使用10 倍与40 倍的物镜,是因为激光光照射到微电极时,微电极于针孔前的成像有所差异,
10倍收光物镜使用1 mm 大的针孔时,实际于晶片上的尺寸为34 μm,
而激光经透镜聚焦后其直径为26.217 μm 的圆形,但因激光以45 度角入射晶片,
所以会变成短轴26.217 μm,长轴37.075 μm 的椭圆,而微电极的间隙只有20 μm,
10 倍物镜的观察区34 μm,就会将微电极的激光反射光一起接收,造成接收过多无效杂讯的情形;
而40 倍物镜的于实际晶片上的观察区约9 μm 小于电极间隙20 μm,就可避
免接收到微电极的反射光,降低杂讯。
实验数据是以1 M欧姆的讯号电阻、激光功率2 mW、光电倍增管电压800 V、带宽滤
镜519~525 nm,配合不同收光物镜倍率等设备状态获取单颗粒介电泳
生物晶片之制造与研究
可以发现荧光最大讯号放大2.8 倍,杂讯与杂讯标准差却各下降0.3倍与0.9 倍,
讯杂比( 136=>457 )提高近 3.4 倍,
最重要的原因乃是40 倍物镜让荧光接收范围变大,微电极激光反射光变小所致。
所以后续实验以40 倍物镜为接收光之物镜
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科