标题：使用油镜镜头或是相位差显微镜观察外部形态
信息分类:站内新闻
作者:yiyi发布
时间:2012-12-19 23:22:33
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正文:
使用油镜镜头或是相位差显微镜观察外部形态
免疫萤光抗体分析法简介
免疫萤光抗体分析法(Immunofluorescence, FA)
免疫萤光抗体是利用抗原与抗体具专一性结合之原理，将欲检测之微生物注射入动物体内，
诱发动物体内免疫系统产生抗体，另外再将这些单株抗体注射入他种动物体内，诱发能与该单株抗体
结合之第二剂抗体，经纯化后在该第二剂抗体接上萤光标记物，
这些标记物会在紫外光下发出特定的萤光，因此只要将微生物样本与
第一剂抗体及附有萤光标记的特定抗体混合，再将没有反应的抗体
洗掉，将样本放在萤光显微镜下，没有萤光结合的微生物便黯的淡
无光，附有萤光标记的微生物则闪闪发亮，很容易将我们想找的微
生物与其他的微生物区别出来。这情形就像将游泳池的灯光关闭，
周围一片漆黑，只有我们想找的玻璃珠闪闪发光，很容易就挑选出来。
进行免疫萤光抗体分析法时需要做一组对照组分析的主要目的
是要确定是否所有样本都能与分析药剂作用、分析步骤是否正确、
显微镜是否能调整至最佳状况。进行镜检时，
首先使用萤光显微镜(Epifluorescence)来观察正对照组的玻片上是否有发出萤光苹果绿
的梨形鞭毛虫及隐孢子虫。
假如观察不到苹果绿的萤光原虫体，表
示萤光染色的过程有问题，或是正对照组的制备过程发生错误，要
等到检查出问题后才可以测试样本溶液中的原虫。假如能观察到发
出萤光的原虫，则将玻片由萤光显微镜移至100 倍的油镜镜头或是
相位差显微镜下。观察梨形鞭毛虫囊孢子之内部构造，包括1 至 4个he，Axonemes 及中体(Median Bodies)，可用目镜微尺(Occular
Micrometer)来记录它的大小。观察负对照组样本时，假如没有发现任何原虫，
而且背景的萤光强度非常弱，可继续做水样原虫的玻片观察。
假若发现萤光染色的原虫，则可能玻片样本受污染，须清洗设备，并检查所有的试剂及流程。
确定正负对照组都没问题后，用萤光显微镜观察整个盖玻片的范围。观察时，放大倍率需为200倍以上。当有椭圆形的萤光出现时，
将镜头转为油镜镜头或是相位差显微镜观察原虫内部构造，并记录下所看到的外型及内部胞器，
将空囊体(Empty Cysts)及有胞器的囊体分开记录及计数，
两者相加即为梨形鞭毛虫囊孢子用免疫萤光抗体法计数所得的总数。当出现卵形或圆球形萤光点时，
亦将镜头转为油镜镜头或是相位差显微镜，观察并记录胞器的外部形态及内部构造，将空囊卵孢子(EmptyOocysts)及有胞器的卵孢子分开记录，
两者相加即为隐孢子虫卵孢子用免疫萤光抗体法计数所得的总数
出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科