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正文:
一、微生物分离技术
(一)Streak(or spread)Plates划碟法
将接种环烧红灭菌,待冷却再取细菌样品,依同方向一划线(将培养皿微开),此具有稀释作用,使每区菌数渐稀,菌落能分开而单独产生,划定后放入保温箱中培养,37℃,24hr。
(二)Poured plates倒碟法(注入法)
以稀释水稀释菌种水样3~4次,取出1ml,置于已灭菌(121℃,15psi,15min)之培养皿中央,再倒入培养基(液),摇动混合均匀,培养后取出计数,即知1ml内之细菌数。(稀释水含MgSO4.7H2O、KH2PO4缓衝液)。
二、鉴定(Identification)
(一)显微镜观察
菌体外形、大小、排列、运动性、染色、颜色、透明度,孢子染色、荚膜染色、鞭毛个数,添加酸性酒精是否变色。
(二)生化特性
1.碳源之利用:如乳糖之利用,产生酸使pH值降低,产生H2O、CO2,淀粉(I2-KI)。
2.氮源之利用:如胺基酸利用产生H2S,NH3
3.硝酸盐之作用:NO3-→NO2-→HN4+
4.酵素之作用:尿素分解NH3、CO2
例如IMViC test为大肠杆菌及产气杆菌之鉴别试验
(1)I: Indole test
细胞色素氧化脢 Cytochrome Oxidase
Tryptephane(含pepton)→indole
经培养如有indole代谢中间产物存在遇了醚会呈红色,结果E.coli呈阳性反应(红色),而产气杆菌呈阴性反应。
(2)M: Methyl red test(测试pH值)
E.coli培养液中产生酸使pH<4.5,则呈红色反应为阳性产气杆菌培养液不产生酸则pH>4.5,呈黄色反应为阴性
(3)Vi: Voges-Prokauer reaction
此反应在测试葡萄糖经分解后是否产生acetylmentyl carbinol代谢产物,此代谢产物与培养液中之冗酸作用,会产生红色化合物。大肠杆菌不呈红色,产气杆菌呈红色
(4)C: citrate test
产生杆菌可利用柠檬酸(Citrate)作为唯一碳源而生长,而E.coli则否。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科