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正文:
本研究的实验操作时,需注意儘量不要让培养皿暴露在空气中,且儘量要在无菌操作台 内操作,才不会有非实验采样的细菌污染。
一、制备固态培养基
根据维基百科(2009年2月17日)指出:LB培养基,是微
生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌。所以我们就采用LB 固态培养基来做实验的材料。
(一)实验材料LB 固态培养基配方如下(根据维基百科,2009):
1. 氯化钠 (NaCl) 10克
2. 蛋白水解物 (tryptone) 10克
3. 酵母抽出物 (yeast extract) 5克
4. 洋菜胶 (agar) 15克
(二)LB 固态培养基制作步骤:
1. 将上述配方加蒸馏水搅拌溶解。
2. 用氢氧化钠调pH值至7.0。
3. 用量筒定体积至1公升。
4. 移至杀菌釜中121°C高温杀菌20分钟。
5. 待温度降到约60°C,移到无菌操作台。
6. 再倒入无菌培养皿中让它凝固。
一公升可制备约40个无菌培养基,共準备80个无菌培养基,保存于4℃冰箱备用。
二、寻找细菌最适合的生长条件:
研究时必须注意实验安全,在实验室里有无致病性的大肠杆菌,所以我们才采用这种无致病性的大肠杆菌为这次寻找细菌最适合的温度和酸碱值的测试对象。
(一)寻找细菌适合生长的温度:
保存食物的温度是4°C,培养基经过4℃的低温储存是否会破坏培养基的营养,影响细菌的生长?一般人体的温度是37℃,所以我们要看看细菌在37℃的环境下是否生长的很好?培养基制作的过程中,使用60℃杀菌,60℃是否有杀菌的功能?所以我们共测试三种生长温度:4℃、 37℃ 、60℃ 。步骤如下:
1. 将0.1 c.c.实验用无致病性的大肠杆菌(Escherichia coli)平均滴在培养基上,用玻棒涂匀,再分别放入4℃冰箱、37℃与60℃培养箱中培养大约20个小时。
2. 将步骤1.中的4℃的培养皿放入37℃的培养箱中培养一天后观察并纪录结果。
3. 将步骤1.中的60℃的培养皿放入37℃的培养箱中培养二天后观察并纪录结果。
4. 确认37℃是否适合细菌生长的良好温度。
(二)寻找细菌适合生长的酸碱:
根据维基百科建议:要将培养皿调至中性。显示培养基的酸碱值会影响细菌的生长。所以我们想要检验酸碱值到底会不会影响细菌的生长?我们找了盐酸(HCl, pH = 2.0)、氢氧化钠(NaOH, pH = 10.0)和中性(pH = 7.0)。步骤如下:
1. 把约0.4 c.c.盐酸(HCl, pH = 2.0)和约0.4 c.c.氢氧化钠(NaOH, pH = 10.0)均匀涂抹于无菌培养基中,静置,等待溶液吸入改变培养基pH值。
2. 分别将0.1 c.c.大肠杆菌用玻棒均匀涂抹于步骤1.调制的酸性、碱性和中性,放置 37C培养箱培养一天后观察并纪录结果。
3. 确认中性是否适合细菌的生长。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京显微镜百科