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显微镜镜检常用的六种方法！

1. 革兰氏染色法（Gram staining）﹕于1884年由丹麦微生物学家Hans Christian Gram所发明。此鉴别染色法可以将细菌分成革兰氏阳性菌（G+）及革兰氏阴性菌（G-），但是高等动物细胞则无法被革兰氏染色剂染色。革兰氏染色有四个步骤﹕首先在已固定的抹片上，滴加结晶紫（crystal violet），经过一分钟让细菌吸收染剂，然后用水冲掉，加入碘化钾溶液，碘与结晶紫和细菌的细胞壁反应一分钟后，用水洗掉，再加入脱色剂，通常是95﹪酒精或丙酮。无法被脱色的细菌，称为革兰氏阳性菌，保留染剂的原因与细菌的细胞壁构造有关；而能被脱色的细菌，称为革兰氏阴性菌，需要使用对比染色剂番红（safranin）将被脱色的革兰氏阴性菌染成粉红色。

2. 抗酸染色法（acid-fasting staining）﹕又称Ziehl-Neelsen staining，有些菌体外包脂肪质或蜡质物质，当用强脱色剂处理后，仍会保留染色的颜色，这些细菌就叫抗酸菌。染色后的抗酸菌呈粉红色或红色，非抗酸菌则为蓝色。

3. 鞭毛染色法（flagella staining）﹕鞭毛形体大小接近光学显微镜解像力的限制，所以染色前需先使用染媒，使鞭毛有化学沉淀生成，增大鞭毛，然后用碱性洋红染色，染色后鞭毛呈红色，而细胞为蓝色。

4. 荚膜染色法（capsule staining）﹕荚膜为黏质外层，成份为多醣体，较难染色，可以使用印度墨水（India ink）行阴性染色（见○图2-8○）。

5. 孢子染色法（spore staining）﹕使用孔雀绿（malachite green）和番红（safranine O）染色，孢子染成绿色，而菌体为红色。

6. 细胞壁染色法（cell wall staining）﹕细胞壁厚，染色不易，但可以先用染媒剂处理，使细胞壁呈正电荷，再用酸性染剂处理。

3、阴性染色法（negative staining）﹕菌体本身不染色，而是将背景部份染色。例如使用印度墨水或黑色素（nigrosin）染色，以油镜或暗视野显微镜镜检。

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