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正文:

鱼类病毒的分离：

A.病材准备：
1.以无菌操作摘取疑似感染的器官，将它切碎。
2.加入少量含有抗生素(penicillin 1000 unit/ml 与 streptomycin 1,000μg/ml)
及 0.5%(W/V)牛白蛋白之磷酸缓冲液(PBS, pH7.2 )，以研钵将其磨碎均质化，
做成 10 倍乳剂，保存于-20℃。
3.使用前将此均质液以 3,000g 离心 10 分钟，回收上清液，用做后续的检验。
B.细胞培养分离法：
1.取 4 支长满无特定病原鱼(SPF)来源之鱼类细胞 25cm2 组织培养瓶，各接种
0.5ml 样品，在 24℃吸附 30 分钟。
2.以 PBS 衡盐液洗 2 次。
3.加入细胞维持液，放 24℃恆温箱培养。
4.每日于倒立光学显微镜下观察是否有细胞病变效应(cytopathic effect ,CPE)，若有则会出现圆形折射性细胞，或细胞碎裂。
5.观察 6 天后仍没有 CPE，则将它冷冻解冻后溶液接种新的细胞，此步骤可能需
要重複至少 3 次。
6.若发现 CPE，则病毒应以抗血清进行中和试验 (virus neutralization ,VN)

出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科