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植物病毒检测技术介绍,植物病毒血清与分子检测技术,金相显微镜专家！

　　为生产符合规定的健康种苗，须先行亲本的病毒检测，确定无病毒后，才能进行组织培养，并进入大量繁殖的阶段，因此，病毒检测技术实为作物迈向健康种苗产业之重要关键。植物病毒检测诊断技术包括：病徵诊断法、生物检定法、病毒内含体诊断技术、电子显微镜技术、血清检定法与核酸检测技术，其中病徵诊断法与内含体观察须由经验丰富者判断，且部分植物病毒病害的病徵与微量元素缺乏引起的病徵相似，易致误判；生物检定法虽然成本低廉，但是须有隔离温（网）室及 7 ~ 10 天观察期；电子显微镜不但造价昂贵且须专人操作，恐怕无法应用于产业界，目前仍以学术性观察病毒颗粒之研究为主。

　　鉴于植物病毒颗粒结构主要以外部的鞘蛋白及内部的核酸为主，因此植物病毒检测技术可分为 2 个主流：一为针对鞘蛋白的抗血清检定技术，以酵素连结抗体吸附反应（ Enzyme-linked immunosobent assay, 简称 ELISA ）为主；另一则针对内部核酸物质的核酸检测技术，以反转录核酸聚合脢连锁反应（ Reverse transcription- PCR ， 简称 RT-PCR ）为主。近年，随着动植物疫病快速检测诊断之需求，学者更将分子生物学、酵素动力学、电子学、光学与讯号处理等技术结合成生物晶片 (Biochip) ，应用于植物病毒的检测。以下针对 ELISA 、 RT-PCR 及生物晶片等植物病毒检测技术加以介绍：

一 . ELISA

　　此技术係利用抗体与抗原的专一性结合，经由标定于抗体上酵素之作用，将检测结果以颜色变化呈现，辅以仪器读取其吸光度数据，俾凭判断正负反应。因其抗体抗原结合顺序差异或酵素连接抗体与抗原的直接与间接性，又可分为直接法与间接法，目前以间接法应用较广。此技术不仅具有快速、专一、方便及经济等特性，更适用于大量样品之病毒检测，加上结果之再现性与稳定性均深获各界肯定，因此，此技术已被种苗业界广泛使用。

二 . RT-PCR

　　核酸检测法係建立于物种间独特的核酸序列，然后依此序列设计出该物种人工合成的短片段专一性核酸引子对，再配合核酸聚合酵素连锁反应 (Polymerase Chain Reaction, 简称 PCR) 技术，此技术乃利用一种分离自细菌的耐高温核酸複製酵素，在适宜的变温循环程式下，针对目标病毒的特定区域核酸进行快速複製，约经 2 小时 30 个循环左右，即可複製出约 2 30 （约 10 亿）倍的核酸，再经由电泳分析以肉眼判别所增幅的核酸条带。植物病毒核酸大多属于 RNA ，故在变温循环前，须先以病毒反转录酵素（ reverse transcription ）进行 RT-PCR ，将 RNA 反转录成 DNA 分子。

　　由于基因体核酸乃各种病毒蛋白前驱物，而 PCR 係针对病毒核酸分子进行检测，因此理论上比 ELISA 技术更敏感，可更早侦测到病毒的存在。