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正文:

关于红血球的萤光染色用nile red是否恰当

我的的染色步骤是先取3ul的血球溶到等渗透压的蔗糖水溶液内加以轻微晃动分散，

接着将nile red染剂2ul加入，一样轻微晃动5分钟使其均匀溷和，最后以离心置换蔗糖

水溶液的方式将多馀的染剂去除掉(清洗两次)，再加入调整过导电度的等渗透压buffer

可是问题来了，经过离心清洗过后红血球变得相当难分散，在显微镜底下确认过都聚集
成一团一团的状况，想请教的问题是有可能是nile red的影响导致抗凝血剂失效吗，又
或是说抗凝血剂本身有问题?

北京上光仪器回复：
是用 EDTA tube (紫头管)吗?  PBS 洗三次, EDTA 洗掉, 凝血因子也洗掉了还会 agglutination 大概是没洗乾淨 还有, 高浓度的 sucrose 会抑制 agglutinationFYI, 洗乾淨的 RBC, 室温一个礼拜都不会 agglutination. (没乾掉的话)
如果PBS洗完还是一堆 agglutination, 我猜是採血完没跟 EDTA mix 均匀
抽血, 确定马上抽完马上mix均匀