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正文:

荧光显微镜荧光法染色及观察花柱中花粉管
1. 剪下花柱或整朵小花以Carnoy’s solution固定24小时以上。
2. 材料充分水洗后，以8 N NaOH进行组织透化及软化处理，时间随材料性质不一，如欲加速作用，可置于烘箱中促进之。
3. 水洗除去大部分的NaOH。
4. 以0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4染色4小时。
5. 材料取出放在载玻片上，加几滴染液，盖上盖玻片，轻压展平。
6. 荧光显微镜观察。
7. 如欲暂时保存，可用腊或透明指甲油将盖玻片四周封住，室温下可置放几天。冰箱低温下（4-5℃）则可保存1-2个月不变质。
＃材料固定时，可将整个花（剥去花冠）固定。但为以后软化及观察方便，水洗除去固定液后，可先行以解剖刀及解剖针在解剖显微镜下将花剥开，仅挑出雌蕊部份进行软化。子房如过大也需剔除胚珠的大部份覆盖组织，以利以后花粉管伸入胚珠之观察。
＃0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4染剂配制方法：
先配制0.1 N K3PO4再缓缓加入0.1％的量的aniline blue粉末，K3PO4溶液为碱性，aniline blue会由深蓝色变成透明的无色或澹黄色的溶液，所以必需将染剂搅拌至溶液透明，约需时30分钟以上。
花粉管观察使用药品之配制
1. 配制Carnoy’s固定液。
2. 配制8 N NaOH。
3. 配制1％aniline blue in 0.1 M K3PO4。
4. 荧光显微镜。
＃Carnoy’s fixative
95％ or 100％EtOH    6 ml
chloroform            3 ml
acetic acid            1 ml
渗透力强，固定快速，故而固定之时间不宜太长，花粉约10-60分钟。
＃0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4
1. Prepared 0.1 M K3PO4 soln’.
2. Add aniline blue powder slowly.
3. Until the aniline blue turn colorless.（at least 30 mins）
＃Safranin
1. Add 2.25 g Safranin to 225 ml 95％EtOH.
2. Dilute with an equal volum of dist. water when needed.
花柱中花粉管之荧光法染色及观察
上课前准备器材及消耗品
植物材料：醡酱草花
Carnoy固定液（醋酸：95％酒精=1：3）
蜡或透明指甲油
8N NaOH
0.1％ aniline blue in 0.1M K3PO4 荧光染剂
明视野显微镜*1
解剖显微镜*1
荧光显微镜*1

出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科