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正文:

用倒立显微镜观察原生质体的制造

第一天---准备

1.洗手。菠菜（spinach）、喇叭花（petunia）、烟草（tobacco）或大型绿藻（Green Macroalgae）的叶子，放在水龙头下将叶子润湿，并拍乾。轻轻用镊子或针刮叶子的下面。然后，切叶子约一公分平方的大小，并放入培养皿。取得足够的叶片组织来覆盖培养皿表面。（大型绿藻则用乾淨海水冲洗）

2.取10ml 的缓冲溶液到15ml的试管或小烧杯，加入先前量好的酵素粉末

3.到溶液内。搅拌或盖住离心管前后摇晃直到酵素完全溶解。

4.小心地注入10ml的酵素液到培养皿的底部。

5.用镊子将悬浮在酵素液的叶子压下使其和溶液接触，叶子可能会稍微重迭。

6.用parafilm或胶带封培养皿并放置在室温（约25℃）一天。若有足够的设

备，轻微地搅拌培养皿将是有帮助的。

7.确定事先已准备一盘的叶子在不含酵素的缓冲溶液内。

第二天---观察

8.轻微地搅拌并摇晃在培养皿的溶液（如果在显微镜内没有观察到原生质

体，则在间隔15~30min再观察一次）。

9.准备一个未处理过叶子的玻片，并观察其细胞的表面。

10.观察原生质体：

a.拿掉parafilm和盖子，置培养皿于解剖显微镜约50 X【注：亦可直接用倒立显微镜观察】下观察或

b.用一个大孔径的吸量管轻轻地吸取一些绿色的溶液并放置在显微镜玻片上。用盖玻片覆盖，以低倍光学显微镜下浏览之。
# 问题分析

1.描绘浸在不含酵素的缓冲溶液中的叶片细胞，标示所有观察的部份并描绘细胞的外形。注意放大的倍率。

2.描绘含有酵素的溶液中的几颗原生质体，并形容它们的表面（注意放大的倍率）。

3.在什么情形下原生质体和未处理的植物细胞不同？

4.原生质体和动物细胞的比较如何？

5.准备一个玻片，放一片在含有酵素溶液的叶片，描绘并形容其边缘。（注意放大的倍率）

6.基于你对原生质体和叶片的观察以及植物细胞构成的知识，假设有关在酵素溶液内酵素的作用。

6.为什么需要刮取并切叶片成小片？

7.为什么要温和小心地对待原生质体？

8.DNA可被加在经特别处理过的细胞溶液中，在这样的情况下细胞将会吸取（uptake）DNA。DNA转殖的技术已常被用在细菌和酵母菌细胞之间。且不需制造原生质体。为什么茄科在转殖前必须先制备原生质体。

出自http://www.bjsgyq.com/北京显微镜百科